ABSTRAK
Studi ini meneliti efek dari asupan makanan uji yang mengandung ekstrak kulit biji kedelai hitam (BE) pada kualitas tidur orang dewasa Jepang yang sehat dengan kualitas tidur yang buruk. Uji coba kelompok paralel, acak, terkontrol plasebo, double-blind ini melibatkan 94 peserta. Kami secara acak menugaskan 64 peserta yang memenuhi syarat ke ( n  = 32 per kelompok) (i) kelompok BE yang menerima kapsul yang mengandung BE setiap hari atau (ii) kelompok Plasebo yang menerima kapsul plasebo setiap hari. Hasil utama adalah kantuk pada skor meningkat dalam inventaris tidur Oguri–Shirakawa–Azumi MA (OSA-MA) pada 12 minggu setelah asupan, dan hasil sekunder adalah OSA-MA, PSQI-J, kuesioner asli (skala analog visual), skor POMS2, tes tidur, aliran darah, suhu permukaan palmar, dan data tes darah. Analisis akhir mencakup data dari 64 peserta. Kantuk pada skor meningkat secara signifikan lebih tinggi pada kelompok BE dibandingkan pada kelompok plasebo. Pada kelompok BE, latensi awal tidur dan mulut kering subjektif menurun secara signifikan, dan suhu permukaan telapak tangan meningkat secara signifikan. Lebih jauh, BE secara efektif mengurangi rasa kantuk saat bangun tidur pada pria dan meningkatkan durasi tidur total pada wanita. Bagi peserta berusia ≥ 40 tahun, BE memperbaiki penurunan kualitas tidur dan mulut kering yang berkaitan dengan usia. Peningkatan tidur nyenyak dan berkurangnya rasa kantuk saat bangun tidur diamati pada mereka dengan kualitas tidur yang buruk. Tidak ada kejadian buruk yang dilaporkan. Asupan BE meningkatkan vasodilatasi dan meningkatkan suhu kulit, mengurangi latensi awal tidur dan secara signifikan memperbaiki rasa kantuk saat bangun tidur. Mekanisme ini dikaitkan dengan efek antioksidan dan neuromodulatori otonom BE.

Registrasi Uji Coba: UMIN-CTR: UMIN000051261

1 Pendahuluan
Kurang tidur kronis mengganggu toleransi terhadap stres dan pengambilan keputusan serta meningkatkan risiko obesitas, hipertensi, diabetes, dan penyakit kardiovaskular (Mader et al. 2022 ). Kurang tidur mengakibatkan peningkatan cedera terkait pekerjaan dan kecelakaan lalu lintas, penurunan produktivitas, dan peningkatan pemanfaatan layanan kesehatan (Mader et al. 2022 ). Kurang tidur diperkirakan menyebabkan total kerugian ekonomi sebesar USD 680 miliar per tahun di Amerika Serikat, Inggris, Jerman, Kanada, dan Jepang (Hafner et al. 2017 ). Hal ini diyakini disebabkan oleh (1) penurunan tenaga kerja karena kematian dan penyakit, (2) berkurangnya efisiensi kerja karena kinerja yang buruk, dan (3) hambatan pengembangan keterampilan, yang diakibatkan oleh kurang tidur. Kekurangan tidur merupakan masalah sosial yang penting. Menurut survei oleh Organisasi untuk Kerja Sama Ekonomi dan Pembangunan (OECD) pada tahun 2021, durasi tidur rata-rata orang Jepang adalah 7 jam dan 24 menit, terendah di antara 33 negara anggota OECD (OECD 2021 ), yang menunjukkan bahwa orang Jepang memiliki kualitas tidur yang buruk dalam skala global. Menurut Survei Kesehatan dan Gizi Nasional Jepang pada tahun 2019 (Kementerian Kesehatan Tenaga Kerja dan Kesejahteraan 2019 ), sekitar 30% orang Jepang tidak memiliki masalah dengan kualitas tidur, sedangkan sisanya mengeluh “merasa mengantuk di siang hari,” “mengalami kesulitan bangun saat tidur di malam hari,” “tidak puas dengan kualitas tidur secara keseluruhan,” dan “tidak cukup waktu tidur.” Mengenai kesehatan fisik dan mental, pentingnya tidur yang cukup disebutkan dalam “Health Japan 21 (periode ketiga),” kebijakan dasar yang ditetapkan oleh pemerintah Jepang untuk secara komprehensif mempromosikan kesehatan masyarakat Jepang (Kementerian Kesehatan, Tenaga Kerja, dan Kesejahteraan 2023 ), dan peningkatan kualitas tidur dikaitkan dengan peningkatan kualitas hidup (Matsui et al. 2021 ). Dengan demikian, efek makanan terhadap kualitas tidur pada orang sehat harus diselidiki.

Kacang kedelai hitam ( Glycine max (L.) Merill) dikenal karena kulit bijinya yang hitam dan kandungan nutrisinya yang tinggi serta banyak dikonsumsi di Asia. Kulit biji kacang kedelai hitam telah digunakan sebagai obat herbal sejak zaman dahulu, dan buku-buku pengobatan herbal Tiongkok telah menjelaskan efek menguntungkannya pada aliran darah (Namba 2018 ). Konstituen utama ekstrak kulit biji kacang kedelai hitam (BE) adalah polifenol, yaitu proantosianidin dan epikatekin. Polifenol ini memiliki sifat antioksidan (Akagi et al. 2024 ; Florentino et al. 2022 ; Ito et al. 2013 ; Kafer et al. 2023 ; Molinari et al. 2023 ; Wang et al. 2018 ). Dalam penelitian sebelumnya, pria dan wanita Jepang yang sehat yang mengalami kelelahan diberikan 100 mg/hari BE selama 4 minggu. Mereka mengalami berkurangnya rasa lelah dan kantuk sementara di siang hari, yang dikaitkan dengan pengaturan saraf otonom oleh efek antioksidan (Akagi et al. 2021 ). Bahkan, bahan makanan antioksidan selain BE juga dapat meningkatkan kualitas tidur dan mengurangi rasa lelah (Hao et al. 2024 ; Ochiai et al. 2018 ).

Pada manusia, suhu tubuh dan tidur saling terkait, dan suhu kulit punggung tangan dan kaki meningkat relatif terhadap suhu kulit badan sebelum tidur. Amplitudo peningkatan ini berkorelasi positif dengan rasa kantuk (Kräuchi et al. 1999 ). Peningkatan suhu kulit untuk pembuangan panas ini disebabkan oleh peningkatan aliran darah kulit yang diakibatkan oleh pelebaran pembuluh darah perifer (Van Someren 2006 ). Penurunan aktivitas parasimpatis, salah satu aktivitas saraf otonom, dikaitkan dengan penurunan kualitas tidur (Werner et al. 2015 ), dan sistem saraf parasimpatis menunjukkan efek vasodilatasi. Jadi, ketika aktivitas parasimpatis menurun, pembuluh darah menyempit, dan suhu kulit tidak mungkin meningkat. Karena BE dilaporkan meningkatkan fungsi endotel dan aliran darah (Namba 2018 ), pelebaran pembuluh darah dan peningkatan suhu kulit diharapkan dapat meningkatkan permulaan tidur yang lancar dan meningkatkan kualitas tidur. Oleh karena itu, dalam penelitian ini, kami meneliti dampak konsumsi 100 mg/hari BE selama 12 minggu terhadap kualitas tidur pada orang dewasa Jepang yang sehat dan tidak puas dengan kualitas tidurnya, serta mengevaluasi dampaknya terhadap aliran darah dan suhu kulit sebagai hasil sekunder.

2 Bahan dan Metode
2.1 Desain Studi dan Pernyataan Etika
Studi perbandingan kelompok paralel, acak, tersamar ganda, terkontrol plasebo ini menggunakan rasio alokasi 1:1. Komite etik Takara Clinic, Medical Corporation Seishinkai menyetujui protokol studi pada 17 Mei 2023 (ID Persetujuan: 2305–00060-0055-16-TC), dan protokol tersebut didaftarkan di University Hospital Medical Information Network Clinical Trials Registry ( UMIN000051261 ). Studi ini dilakukan sesuai dengan pedoman terbaru Deklarasi Helsinki dan Pedoman Etika untuk Penelitian Medis dan Biologi yang Melibatkan Subjek Manusia di Jepang.

2.2 Peserta
Kriteria inklusi adalah sebagai berikut: partisipan (a) yang merupakan orang Jepang, (b) yang merupakan pria atau wanita, (c) berusia ≥ 30 dan < 65 tahun, (d) yang merupakan individu yang sehat, (e) tidak puas dengan kelelahan subjektif mereka saat bangun dan kualitas tidur (seperti durasi tidur pendek, kesulitan untuk tertidur, kesulitan tidur nyenyak, bermimpi, dan kelelahan terus-menerus) dalam kehidupan sehari-hari, (f) yang dinilai memenuhi syarat untuk berpartisipasi dalam penelitian oleh dokter menurut hasil Beck depression inventory (BDI-II) (Beck et al. 1996 ; Beck et al. 2003 ; Hiroe et al. 2005 ) pada saat skrining (Scr), (g) dengan skor “mengantuk saat bangun” yang rendah pada Oguri–Shirakawa–Azumi sleep inventory MA (OSA-MA) (Yamamoto et al. 1999 ) di antara mereka yang memenuhi (a)–(f) dan tidak memenuhi kriteria eksklusi pada Scr.

Kriteria eksklusi adalah sebagai berikut: peserta (a) menjalani perawatan medis atau dengan riwayat tumor ganas, gagal jantung, atau infark miokard; (b) memiliki alat pacu jantung atau defibrilator kardioverter implan; (c) saat ini menjalani perawatan untuk aritmia jantung, gangguan hati, gangguan ginjal, gangguan serebrovaskular, rematik, diabetes melitus, dislipidemia, hipertensi, atau penyakit kronis lainnya; (d) mengonsumsi “makanan untuk penggunaan kesehatan tertentu,” atau “makanan dengan klaim fungsional” setiap hari; (e) saat ini mengonsumsi obat-obatan (termasuk obat-obatan herbal) dan suplemen; (f) dengan alergi terhadap obat-obatan dan/atau produk terkait makanan uji (terutama, kedelai, serbuk sari, atau susu); (g) yang sedang hamil, menyusui, atau berencana untuk hamil selama uji coba; (h) yang terdaftar dalam uji klinis lain selama 28 hari terakhir sebelum menyetujui untuk berpartisipasi dalam uji coba ini atau berencana untuk berpartisipasi dalam uji coba lain selama uji coba ini; (i) tidak memenuhi syarat untuk berpartisipasi dalam penelitian ini sebagaimana dinilai oleh dokter; (j) tinggal dengan bayi mereka yang berusia < 1 tahun; (k) tidur dengan anak-anak mereka (usia 1–6 tahun); (l) tinggal dengan dan merawat mereka yang membutuhkan perawatan jangka panjang; (m) tidur dengan lebih dari satu orang; (n) dengan waktu tidur yang tidak teratur atau kebiasaan karena pekerjaan, seperti shift larut malam; (o) dengan nokturia ≥ 2; (p) memiliki gaya hidup yang tidak teratur (seperti waktu makan yang tidak konsisten dan durasi tidur yang tidak cukup); (q) yang minum alkohol secara berlebihan (Kementerian Kesehatan, Tenaga Kerja, dan Kesejahteraan 2023 ) (rata-rata > 20 g/hari sebagai asupan alkohol absolut; 500 mL, sebotol bir ukuran sedang atau sekitar 1,5 kaleng chu-hi kalengan; 180 mL, 1 go sake atau sekitar 1,5 gelas anggur; 90 mL, setengah go dengan shochu; 60 mL, segelas wiski/brendi [dobel]); (r) saat ini menjalani perawatan untuk insomnia atau gangguan tidur; (s) mengonsumsi makanan/minuman yang mengandung bahan fungsional yang dapat memengaruhi kualitas tidur (seperti asam gamma-aminobutyric, crocetin, L-theanine, dan bakteri asam laktat).

Semua peserta direkrut melalui situs web daring ( https://www.go106.jp/ ) yang dioperasikan oleh ORTHOMEDICO Inc. (Tokyo, Jepang). Individu yang memberikan persetujuan tertulis melalui jaringan setelah menerima penjelasan terperinci tentang penelitian tersebut didaftarkan. Tidak ada sponsor atau anggota perusahaan pendanaan yang berpartisipasi dalam penelitian ini. Takara Clinic (Tokyo, Jepang) bertanggung jawab untuk melakukan penelitian ini. Data diperoleh dari Medical Corporation Seishinkai, Takara Clinic, dan kesehatan peserta penelitian dipantau di klinik ini.

2.3 Intervensi
BE (ChronoCare SP60; Fujicco Co. Ltd., Hyogo, Jepang) disiapkan seperti yang dilaporkan sebelumnya (Akagi et al. 2024 ). Tabel 1 menyajikan bahan baku dan komposisi BE per kapsul untuk setiap makanan uji. Makanan uji berupa kapsul keras yang mengandung 100 mg (58 mg sebagai total polifenol) ChronoCare SP60 (makanan yang mengandung BE) atau kapsul keras tanpa ChronoCare SP60 (plasebo). Makanan uji diisi ke dalam kapsul keras ukuran 2 dan dikemas dalam kantong zip aluminium. Kedua makanan uji mengandung nilai kalori, protein, lemak, karbohidrat, dan kandungan setara garam yang sama.

TABEL 1. Komposisi makanan uji dalam setiap kapsul.

Komite etik mengonfirmasi bahwa kedua jenis kapsul tersebut tidak dapat dibedakan berdasarkan tampilannya. Para peserta mengonsumsi satu kapsul per hari dengan air setelah makan malam tanpa mengunyah selama 12 minggu.

2.4 Hasil
Tabel 2 menunjukkan jadwal penelitian. Hasil efikasi dinilai pada Scr, 4 minggu (4 minggu), 8 minggu (8 minggu), dan 12 minggu (12 minggu) setelah dimulainya asupan makanan uji. Item evaluasi keamanan diukur pada Scr dan 12 minggu.

TABEL 2. Jadwal penelitian.

2.4.1 Hasil Utama
Hasil utama adalah nilai terukur dari rasa kantuk saat bangun tidur (faktor I) pada OSA-MA pada minggu ke-12. Untuk menyelidiki keadaan rasa kantuk saat bangun tidur, OSA-MA diberikan segera setelah bangun tidur (sebelum menggosok gigi dan mencuci muka) selama 3 hari (2 dan 1 hari sebelum minggu ke-12 dan hari ke-12). Nilai rata-rata dihitung dari skor Zc selama 3 hari pengukuran, dan skor Zc yang lebih tinggi mencerminkan tidur yang lebih baik.

2.4.2 Hasil Sekunder
2.4.2.1 OSA MA
OSA-MA digunakan untuk menyelidiki keadaan tidur saat bangun pada Scr, 4w, 8w, dan 12w. Nilai terukur rasa kantuk saat bangun pada 4w dan 8w serta jumlah dan laju perubahan rasa kantuk saat bangun dari Scr ke 4w, 8w, dan 12w dievaluasi. Selain itu, kami mengevaluasi nilai terukur dan jumlah serta laju perubahan dari Scr untuk inisiasi dan pemeliharaan tidur, sering bermimpi, menyegarkan diri, dan lama tidur, dan setiap pertanyaan pada OSA-MA dievaluasi pada 4w, 8w, dan 12w.

2.4.2.2 Visual Analog Scale (VAS) Gejala Subjektif
Gejala subjektif saat bangun diselidiki menggunakan kuesioner asli dengan VAS (Japanese Society for Fatigue Science 2011a , 2011b ; McCormack et al. 1988 ) pada Scr, 4w, 8w, dan 12w. Item survei meliputi sensasi lelah, mengantuk, bahu kaku, motivasi, sensasi lelah mata, kelesuan dan berat badan, kedinginan, kekeringan mata, mulut kering, dan stres. Garis lurus 100 mm dicetak pada kuesioner; peserta menandai tingkat sensasi mereka saat ini pada garis, dan keadaan terbaik yang dapat dibayangkan diberi 0 dan keadaan terburuk 100. Nilai terukur dari setiap item pertanyaan dalam kuesioner asli pada 4w, 8w, dan 12w dan jumlah dan laju perubahan dari Scr untuk setiap titik pengukuran dinilai. Peserta menjawab kuesioner segera setelah bangun (sebelum menggosok gigi dan mencuci muka) selama 3 hari (2 dan 1 hari sebelum setiap pemeriksaan dan hari setiap pemeriksaan). Nilai rata-rata dihitung dari skor pengukuran selama 3 hari.

2.4.2.3 Versi Jepang dari Indeks Kualitas Tidur Pittsburgh (PSQI-J) (Doi et al. 1998 , 2000 )
PSQI-J digunakan untuk menilai kondisi tidur siang hari pada Scr dan 12 minggu. Nilai terukur dan jumlah serta laju perubahan dari Scr dari skor PSQI global, kualitas tidur subjektif (C1), latensi tidur (C2), durasi tidur (C3), efisiensi tidur kebiasaan (C4), gangguan tidur (C5), penggunaan obat tidur (C6), disfungsi siang hari (C7), dan setiap pertanyaan pada PSQI-J pada 12 minggu dievaluasi. Skor untuk C1–C7 dihitung menurut metode penilaian, dan skor yang lebih rendah menunjukkan status tidur yang lebih baik.

2.4.2.4 Profil Keadaan Suasana Hati Edisi ke-2 (POMS2) (Heuchert dan McNair 2015 ; Masyarakat Ilmu Kelelahan Jepang 2011a , 2011b )
Pada Scr dan 12w, versi bahasa Jepang POMS2 digunakan untuk menilai status suasana hati peserta saat ini, yang mencakup nilai terukur dan jumlah serta laju perubahan dari Scr dari skor gangguan suasana hati total, ketegangan-kecemasan, depresi-kesedihan, kemarahan-permusuhan, kekuatan-aktivitas, kelelahan-kelembaman, kebingungan-kebingungan, keramahan, dan setiap item kuesioner pada 12w.

2.4.2.5 Tes Aliran Darah
Pada Scr dan 12w, laju aliran darah di ujung jari sebelum dan sesudah beban air dingin dihitung menggunakan meteran aliran darah bintik laser (OMEGAZONE OZ-2, OMEGAWAVE Inc., Tokyo, Jepang). Nilai terukur dan jumlah serta laju perubahan dari Scr aliran darah, area di bawah kurva (AUC) dari segera setelah beban, dan jumlah perubahan dari sebelum dan segera setelah beban ke setiap titik waktu pada 12w dievaluasi. Dalam setiap pemeriksaan, beban air dingin dilakukan seperti yang dijelaskan dalam Lampiran S1 , dan pengukuran dilakukan enam kali sebagai berikut: sebelum beban, segera setelah beban, dan 5, 10, 20, dan 30 menit setelah beban. AUC dihitung segera setelah beban, dan perubahannya dihitung berdasarkan temuan sebelum dan segera setelah beban. Uji aliran darah dilakukan pada jari-jari tangan kiri secara bersamaan dengan uji suhu permukaan kulit.

2.4.2.6 Uji Suhu Permukaan Kulit
Suhu permukaan telapak tangan sebelum dan setelah beban air dingin dievaluasi dengan termografi (InfReC R450, Nippon Avionics Co. Ltd., Kanagawa, Jepang) pada Scr dan 12w. Nilai terukur dan jumlah serta laju perubahan dari Scr suhu permukaan telapak tangan dievaluasi pada 12w. Dalam setiap pemeriksaan, beban air dingin dilakukan seperti yang dijelaskan dalam Lampiran S1 , dan pengukuran dilakukan enam kali: sebelum beban, segera setelah beban, dan 5, 10, 20, dan 30 menit setelah beban. AUC dihitung segera setelah beban, dan perubahannya dihitung sebelum dan segera setelah beban. Uji suhu permukaan kulit dilakukan pada telapak tangan kanan secara bersamaan dengan uji aliran darah.

2.4.2.7 Tes Tidur
Kualitas tidur pada waktu tidur dinilai menggunakan InSomnograf (S’UIMIN Inc., Tokyo, Jepang) pada Scr dan 12 minggu. Nilai terukur dan jumlah serta laju perubahan dari Scr pada skor tidur, permulaan tidur, pengimbang tidur, titik tengah tidur, waktu di tempat tidur setelah pengimbang tidur, latensi permulaan tidur, latensi StageR, total waktu NotScored, total waktu N1, total waktu N2, total waktu N3, total waktu rapid eye movement (REM), total waktu tidur (TST), waktu bangun setelah permulaan tidur, efisiensi tidur (%total waktu perekaman [TRT]), persentase N1 (%TST), persentase N2 (%TST), persentase N3 (%TST), dan persentase REM (%TST) dievaluasi pada 12 minggu. Untuk setiap pemeriksaan, pengukuran dilakukan selama 3 hari (1–3 hari sebelum pemeriksaan), dengan peserta mengenakan perangkat pada waktu tidur. Nilai rata-rata dihitung dari skor selama 2 hari sebelum pemeriksaan.

2.4.2.8 Tes Darah
Tes darah dilakukan pada Scr dan 12w. Nilai terukur dan jumlah serta laju perubahan dari Scr penanda stres oksidatif 8-hidroksi-2′-deoksiguanosin (8-OHdG), zat reaktif asam 2-tiobarbiturat (TBARS), produk metabolik oksida nitrat (NO), dan pentosidina dievaluasi pada 12w. Untuk setiap pemeriksaan, sekitar 15 mL darah vena dikumpulkan dari peserta, dan sampel darah dipisahkan menjadi sekitar 5 mL serum dan dibekukan. Pengujian dilakukan di Fujicco Co. Ltd.

2.4.3 Evaluasi Keamanan
Penilaian keamanan meliputi pengukuran fisik, urinalisis, dan tes darah. Pengukuran fisik meliputi berat badan, indeks massa tubuh (IMT), dan tekanan darah sistolik dan diastolik. IMT dihitung menggunakan tinggi badan yang diukur di Scr.

Dalam urinalisis, protein, glukosa, pH, dan darah samar diukur. Setiap item diukur menurut metode standar oleh LSI Medience Corporation (Tokyo, Jepang).

Tes darah meliputi jumlah sel darah putih, jumlah sel darah merah, kadar hemoglobin, kadar hematokrit, jumlah trombosit, kadar aspartat aminotransferase, kadar alanin aminotransferase, kadar γ-glutamil transpeptidase, kadar bilirubin total, kadar protein total, kadar nitrogen urea, kadar kreatinin, kadar asam urat, kadar natrium, kadar kalium, kadar klorida, kadar amilase serum, kadar kolesterol total, kadar kolesterol lipoprotein densitas tinggi dan rendah, kadar trigliserida, kadar glukosa, dan kadar hemoglobin A1c (NGSP). Setiap item diukur menurut metode standar oleh LSI Medience Corporation.

Jumlah kejadian buruk dicatat. Dalam kejadian tersebut, dokter segera memberikan tindakan yang diperlukan dan tepat serta memutuskan apakah peserta dapat melanjutkan penelitian dan apakah kunci darurat harus dibuka. Dokter juga mengevaluasi dan melaporkan hubungan antara kejadian buruk dan makanan intervensi.

Wawancara dilakukan di setiap titik penilaian untuk memastikan status kesehatan peserta. Peserta diminta untuk mencatat kondisi kehidupan mereka sehari-hari, termasuk asupan makanan yang diuji, perubahan kondisi fisik, dan penggunaan obat-obatan dalam buku harian mereka.

2.5 Ukuran Sampel
Karena tidak ada studi yang mengevaluasi kualitas tidur berdasarkan rasa kantuk saat bangun pada OSA-MA setelah 12 minggu konsumsi makanan yang mengandung BE pada manusia, kami berasumsi adanya perbedaan besar antara kelompok (makanan uji yang mengandung BE dan plasebo), dan d  = 0,80 berdasarkan saran Cohen digunakan (Cohen 1992 ). Tingkat signifikansi statistik (α) ditetapkan pada 0,05, dan daya statistik (1 − β) ditetapkan pada 0,80. Minimal 52 partisipan ( n  = 26 pada setiap kelompok) diperlukan. Untuk memaksimalkan daya statistik (1 − β) dalam anggaran, target jumlah partisipan ditetapkan pada 60 ( n  = 30 pada setiap kelompok). Daya statistik (1 − β) dihitung ulang, yaitu 0,86. Untuk mengantisipasi putus sekolah dan ketidakpatuhan selama periode studi, jumlah partisipan ditetapkan pada 64 (32 pada setiap kelompok).

2.6 Seleksi, Pengacakan, dan Penyamaran
Di antara 94 peserta yang setuju untuk berpartisipasi, 64 orang ditetapkan memenuhi syarat oleh dokter. Makanan uji disediakan oleh Fujicco Co. Ltd. kepada organisasi penelitian kontrak (CRO). Pengirim makanan uji CRO mengonfirmasi bahwa makanan uji tidak dapat dibedakan, memasukkan dan mengonfirmasi data penyaringan, dan memberikan nomor identifikasi kepada pengendali alokasi, yang tidak terlibat langsung dalam penelitian. Alokasi dilakukan dengan alokasi acak blok berstrata dengan faktor penyesuaian alokasi rasa kantuk saat bangun pada OSA-MA (di atas dan di bawah median pada data Scr), jenis kelamin (pria dan wanita), dan usia (≥ 40 dan < 40 tahun), dan pengendali alokasi secara acak mengalokasikan 32 peserta ke dalam kelompok makanan yang mengandung BE (kelompok BE) dan kelompok Plasebo menurut tabel digit pengacakan yang dibuat komputer. Hanya pengirim makanan uji CRO, yang menerima tabel alokasi dengan makanan uji berkode, yang mengirimkan makanan uji kepada setiap peserta menurut tabel alokasi. Pengendali alokasi mengunci tabel alokasi hingga hari pembukaan. Sponsor, peneliti utama, seluruh staf CRO (yaitu, direktur uji coba, direktur pelaksanaan uji coba, orang yang bertanggung jawab atas pemantauan, direktur dan staf analisis statistik, dan orang yang bertanggung jawab atas pengiriman), staf institusi medis, anggota dewan peninjau institusi, laboratorium kontrak, dan pihak lain yang terlibat dalam penelitian ini tidak mengetahui penugasan kelompok dan tidak terlibat dalam alokasi.

2.7 Analisis Statistik
Semua analisis statistik dilakukan menggunakan uji dua sisi, dan tingkat signifikansi ditetapkan pada 5%. IBM SPSS Statistics for Windows versi 23.0 (IBM Japan Ltd., Tokyo, Jepang) digunakan, dan perangkat lunak statistik tervalidasi lainnya digunakan sesuai kebutuhan. Karena analisis difokuskan pada hasil utama, banyaknya kejadian hasil sekunder tidak dipertimbangkan.

Mengenai karakteristik peserta, jenis kelamin dinyatakan sebagai jumlah laki-laki dan perempuan dalam kelompok. Item lainnya dinyatakan sebagai rata-rata dan simpangan baku (SD). Perbandingan antarkelompok dilakukan dengan menggunakan uji chi-kuadrat untuk jenis kelamin dan uji- t Welch untuk item lainnya.

Data yang dikumpulkan dari OSA-MA dan kuesioner asli disajikan sebagai rata-rata dan SD. Perbedaan antara kelompok BE dan plasebo (kelompok BE dikurangi kelompok Plasebo; pada Scr, perbedaan rata-rata; setelah intervensi, estimasi perbedaan rata-rata marginal [EMM]) dan interval kepercayaan (CI) 95% ditentukan. Data Scr dibandingkan antara kelompok menggunakan uji- t Welch untuk data dasar, dan data pascaintervensi dibandingkan menggunakan model campuran linier dengan dasar sebagai kovariat dan waktu, kelompok, waktu dan interaksi kelompok, dan peserta studi sebagai faktor.

Nilai PSQI-J, POMS2, uji aliran darah, dan uji suhu permukaan kulit disajikan sebagai rata-rata dan SD. Perbedaan antara kelompok BE dan plasebo (kelompok BE dikurangi kelompok Plasebo; pada Scr, perbedaan rata-rata; setelah intervensi, perbedaan EMM) dan 95% CI-nya ditampilkan. Data Scr dibandingkan antar kelompok menggunakan uji- t Welch untuk data dasar, dan data pascaintervensi dibandingkan dengan analisis kovariansi dengan nilai dasar sebagai kovariat dan kelompok sebagai faktor. Setiap item pertanyaan dari PSQI-J dan POMS2 dinyatakan sebagai minimum, median, maksimum, rentang kuartil (kuartil pertama, Q1; kuartil ketiga, Q3), dan jumlah peringkat untuk setiap kelompok dan dibandingkan antar kelompok menggunakan uji Mann–Whitney U. Analisis subkelompok menggunakan metode analisis yang sama seperti untuk analisis keseluruhan.

Dalam evaluasi keamanan, kejadian buruk disajikan sebagai jumlah peserta dalam kelompok, tingkat kejadian dalam kelompok, perbedaan tingkat kejadian, dan 95% CI dari tingkat kejadian. Proporsi kasus urinalisis dan temuan darah yang abnormal setelah intervensi digabungkan untuk setiap peserta studi, dan rasio penerapan digabungkan menurut kelompok. 95% CI dari persentase yang berlaku untuk setiap kelompok dan perbedaan rasio yang berlaku antara kelompok (kelompok BE dikurangi kelompok Plasebo) dihitung. Uji chi-kuadrat dilakukan untuk membandingkan persentase penerapan antara kelompok. Lebih lanjut, penyelidik studi atau dokter secara individual mengonfirmasi keamanan item evaluasi, yaitu, tidak ada perubahan yang bermasalah secara medis yang disebabkan oleh asupan makanan uji.

Kumpulan data analisis dibangun. Kumpulan data intent-to-treat mencakup semua partisipan studi. Kumpulan analisis lengkap (FAS) mencakup semua partisipan, kecuali mereka yang tidak menerima intervensi yang dialokasikan, tidak memenuhi kriteria kelayakan, tidak pernah menerima intervensi setelah alokasi, dan tidak memiliki data pascaalokasi. Kumpulan analisis per protokol mencakup data dari FAS, juga mengecualikan partisipan yang (1) memiliki tingkat asupan makanan uji < 80%, (2) menunjukkan perilaku signifikan yang memengaruhi keandalan hasil uji (misalnya, catatan harian yang hilang), (3) memenuhi kriteria eksklusi setelah pendaftaran, (4) melanggar aturan kepatuhan selama periode studi, (5) mengonsumsi makanan atau obat-obatan yang diperkirakan dapat memengaruhi hasil uji secara signifikan, (6) terlibat dalam aktivitas yang secara signifikan berbeda dari gaya hidup mereka saat pendaftaran studi, dan (7) memiliki alasan yang jelas untuk eksklusi. Populasi analisis keamanan (SAF) mencakup semua peserta studi, kecuali mereka yang memenuhi setidaknya satu dari kondisi berikut: mereka yang (1) tidak menerima intervensi yang dialokasikan, (2) tidak pernah menerima intervensi yang dialokasikan setelah alokasi, atau (3) tidak pernah menjalani evaluasi keamanan yang dialokasikan.

3 Hasil
3.1 Analisis Set
Gambar 1 menyajikan diagram alir tindak lanjut untuk peserta studi. Rekrutmen dilakukan dari 31 Mei hingga 3 Agustus 2023, dan periode studi dari 3 Agustus hingga 23 Desember 2023. Meskipun semua peserta menerima intervensi yang dialokasikan, satu peserta dalam kelompok BE tidak berpartisipasi dalam pemeriksaan setelah 8 minggu, dan satu peserta di setiap kelompok tidak berpartisipasi dalam pemeriksaan 12 minggu. FAS menyertakan kumpulan data untuk analisis hasil efikasi, dan analisis aktual menggunakan FAS1, yang mencakup semua peserta, dan FAS2–FAS5, kecuali untuk peserta yang tidak memiliki data yang disertakan sebagai variabel analisis setelah penugasan. Selain itu, SAF menyertakan kumpulan data untuk titik akhir keamanan, dan tiga peserta (dua dalam kelompok BE dan satu dalam kelompok Plasebo) yang tidak memiliki data pascapenugasan (pengukuran fisik, urinalisis, dan tes darah tepi) dikeluarkan dari analisis. Pada setiap set data analisis, 64 partisipan dimasukkan dalam FAS1 ( n  = 32 pada setiap kelompok), 61 pada FAS2 dan SAF (kelompok BE, n  = 30; kelompok Plasebo, n  = 31), 60 pada FAS3 dan FAS4 (kelompok BE, n  = 29; kelompok Plasebo, n  = 31), dan 60 pada FAS5 ( n  = 30 pada setiap kelompok). Daftar partisipan yang datanya hilang dan daftar partisipan yang dikecualikan untuk setiap set data analisis ditunjukkan masing-masing pada Lampiran S2 dan S3 . Latar belakang partisipan ditunjukkan pada Tabel 3 .

TABEL 3. Karakteristik peserta.

Catatan: Jenis kelamin ditunjukkan berdasarkan jumlah peserta dalam kelompok dan item lainnya ditunjukkan berdasarkan rata-rata, deviasi standar.
Singkatan: BE, ekstrak kulit biji kedelai hitam; FAS, set analisis lengkap; ITT, tujuan pengobatan; SAF, populasi analisis keamanan.
a Lihat Lampiran S3 untuk perbedaan antara setiap FAS.

Beberapa analisis subkelompok dilakukan untuk mengeksplorasi pengaruh asupan BE terhadap kualitas tidur. Karena kualitas tidur dipengaruhi oleh jenis kelamin dan usia (Mander et al. 2017 ), kami menyusun subkelompok untuk pria, wanita, dan peserta berusia ≥ 40 tahun.

Mengonfirmasi skor kantuk saat bangun di OSA-MA berdasarkan latar belakang peserta, variasi besar dicatat dalam FAS1, dengan nilai minimum dan maksimum masing-masing 1,8 dan 25,5 poin (Tabel 3 ) bahkan ketika penelitian ini mencakup individu yang mengeluh kelelahan saat bangun dan kualitas tidur (waktu tidur pendek, sulit tertidur, sulit tidur nyenyak, bermimpi, ketidakmampuan untuk mengatasi kelelahan, dll.) dalam kehidupan sehari-hari. Mempertimbangkan bahwa skor rata-rata kantuk orang dewasa Jepang saat bangun di OSA-MA adalah 17,4 poin (Yamamoto et al. 1999 ), apakah peserta benar-benar tidur dengan kualitas buruk masih dipertanyakan. Oleh karena itu, subkelompok peserta yang skor kantuknya saat bangun di OSA-MA pada Scr di bawah median (14,15 poin) dibangun, dan efek makanan uji pada mereka dengan kualitas tidur yang buruk diperiksa.

3.2 OSA-MA
Untuk skor faktor OSA-MA dalam FAS1, kelompok BE mencatat nilai terukur dan perubahan rasa kantuk saat bangun tidur pada minggu ke-8 dan minggu ke-12 secara signifikan dibandingkan kelompok Plasebo (Gambar 2a ). Pada subitem rasa kantuk saat bangun tidur (pertanyaan 2, 4, 8, dan 14), meskipun tidak ada perbedaan antarkelompok yang signifikan yang dikonfirmasi untuk “Pertanyaan 8_Saya merasa jernih–Saya merasa kepala saya berkabut,” kelompok BE mencatat nilai terukur dan jumlah perubahan yang lebih tinggi secara signifikan pada minggu ke-12 untuk “Pertanyaan 2_Saya terkonsentrasi–Saya tidak terkonsentrasi,” pada minggu ke-8 dan minggu ke-12 untuk “Pertanyaan 4_Saya rileks–Saya stres,” dan pada minggu ke-12 untuk “Pertanyaan 14_Saya dapat menjawab survei dengan cepat dan mudah sekarang juga–Susah menjawabnya” daripada kelompok Plasebo (Tabel 4 ). Tidak ada item lain yang terpengaruh oleh intervensi BE (data tidak ditampilkan).

 

TABEL 4. Perbandingan OSA-MA (setiap item; FAS1).

Singkatan: 12w, 12 minggu setelah konsumsi; 4w, 4 minggu setelah konsumsi; 8w, 8 minggu setelah konsumsi; 95% CI, interval kepercayaan 95%; Jumlah perubahan, jumlah perubahan dari Scr; EMM, estimasi rata-rata marginal; FAS1, set analisis lengkap1; OSA-MA, inventaris tidur OSA versi MA; Laju perubahan, laju perubahan dari Scr; Scr, penyaringan (sebelum konsumsi); SD, deviasi standar; Δ, Perbedaan antara kelompok (kelompok BE–kelompok plasebo).
* p  < 0,05.

Hasil untuk setiap subkelompok untuk rasa kantuk saat bangun dan subitemnya dianalisis, dan menunjukkan perbedaan signifikan antarkelompok setelah intervensi dalam FAS1.

Pada laki-laki FAS1, kelompok BE memiliki nilai terukur dan jumlah perubahan rasa kantuk saat bangun tidur pada minggu ke-8 dan minggu ke-12 secara signifikan lebih tinggi daripada kelompok plasebo (Gambar 3a ). Dalam subitem rasa kantuk saat bangun tidur, kelompok BE mencatat nilai terukur dan jumlah serta laju perubahan yang secara signifikan lebih tinggi pada minggu ke-12 untuk “Pertanyaan 2_Saya terkonsentrasi–Saya tidak terkonsentrasi,” pada minggu ke-8 dan minggu ke-12 untuk “Pertanyaan 8_Saya merasa berpikiran jernih–Saya merasa pusing,” dan pada minggu ke-4, minggu ke-8, dan minggu ke-12 untuk “Pertanyaan 14_Saya dapat menjawab survei dengan cepat dan mudah sekarang–Sulit untuk menjawabnya” daripada kelompok Plasebo (Tabel 5 ). Pada peserta perempuan FAS1, meskipun tidak ada perbedaan signifikan dalam rasa kantuk saat bangun tidur antar kelompok (Gambar 3b ), di antara subitem, nilai terukur dan jumlah perubahan pada minggu ke-8 dan minggu ke-12 dari “Pertanyaan 4_Saya rileks–Saya stres” secara signifikan lebih tinggi pada kelompok BE dibandingkan pada kelompok Plasebo (Tabel 5 ).

TABEL 5. Setiap item rasa kantuk saat bangun di OSA-MA (setiap analisis subkelompok).

Singkatan: 12w, 12 minggu setelah konsumsi; 4w, 4 minggu setelah konsumsi; 8w, 8 minggu setelah konsumsi; 95% CI, interval kepercayaan 95%; Jumlah perubahan, jumlah perubahan dari Scr; EMM, estimasi rata-rata marginal; FAS1, set analisis lengkap1; OSA-MA, inventaris tidur OSA versi MA; Laju perubahan, laju perubahan dari Scr; Scr, penyaringan (sebelum konsumsi); SD, deviasi standar; Δ, Perbedaan antara kelompok (kelompok BE–kelompok plasebo).
* p  < 0,05.

Pada partisipan FAS1 dan mereka yang berusia ≥ 40 tahun, nilai terukur dan jumlah perubahan rasa kantuk saat bangun pada minggu ke-12 secara signifikan lebih tinggi pada kelompok BE dibandingkan pada kelompok plasebo (Gambar 3c ). Untuk subitem rasa kantuk saat bangun, kelompok BE memiliki nilai terukur dan jumlah perubahan yang secara signifikan lebih tinggi pada minggu ke-12 untuk “Pertanyaan 8_Saya merasa jernih–Saya merasa kepala saya pusing” dan pada minggu ke-4 dan minggu ke-12 untuk “Pertanyaan 14_Saya dapat menjawab survei dengan cepat dan mudah sekarang juga–Susah untuk menjawabnya” daripada kelompok Plasebo (Tabel 5 ). Pada partisipan FAS1 dan mereka yang berusia < 40 tahun, tidak ada perbedaan signifikan antara kelompok dalam skor rasa kantuk saat bangun (Gambar 3d ); namun, pada subitem, kelompok BE mencatat nilai terukur dan jumlah perubahan yang secara signifikan lebih tinggi pada minggu ke-12 untuk “Pertanyaan 4_Saya rileks–Saya stres” daripada kelompok Plasebo (Tabel 5 ).

Pada partisipan FAS1 dan mereka yang skor kantuknya saat bangun di atas atau sama dengan median (14,15 poin) di Scr, kelompok BE memiliki nilai terukur dan jumlah perubahan kantuk saat bangun di minggu ke-12 yang lebih tinggi secara signifikan daripada kelompok Plasebo (Gambar 3e ). Untuk subitem kantuk saat bangun, kelompok BE mencatat tingkat perubahan yang lebih tinggi secara signifikan pada minggu ke-12 untuk “Pertanyaan 2_Saya terkonsentrasi–Saya tidak terkonsentrasi” dan nilai terukur dan jumlah perubahan pada minggu ke-12 untuk “Pertanyaan 4_Saya rileks–Saya stres” daripada kelompok Plasebo (Tabel 5 ). Pada partisipan FAS1 dan mereka yang kantuknya saat bangun di bawah median (14,15 poin) di Scr, kelompok BE mencatat nilai terukur dan jumlah perubahan kantuk saat bangun di minggu ke-8 yang lebih tinggi secara signifikan daripada kelompok Plasebo (Gambar 3f ). Untuk rasa kantuk pada subitem yang meningkat, kelompok BE memiliki nilai terukur dan jumlah perubahan yang lebih tinggi secara signifikan pada 8w untuk “Pertanyaan 8_Saya merasa jernih–Saya merasa pusing” dan pada 8w untuk “Pertanyaan 14_Saya dapat menjawab survei dengan cepat dan mudah sekarang–Sulit untuk menjawabnya” daripada kelompok Plasebo (Tabel 5 ).

3.3 VAS Gejala Subjektif
Dibandingkan dengan kelompok Plasebo, kelompok BE memiliki nilai terukur dan jumlah perubahan yang jauh lebih tinggi pada minggu ke-4, minggu ke-8, dan minggu ke-12 untuk bahu kaku dan nilai terukur serta jumlah perubahan pada minggu ke-8 untuk kelelahan mata. Kelompok BE memiliki nilai terukur dan jumlah serta laju perubahan yang jauh lebih rendah pada minggu ke-12 untuk mulut kering dibandingkan kelompok Plasebo (Lampiran S4 ). Tidak ada perbedaan antarkelompok yang signifikan yang diamati untuk item atau titik waktu lainnya (data tidak ditampilkan).

Hasil untuk setiap subkelompok dikonfirmasi untuk mulut kering, yang menunjukkan perbaikan signifikan setelah intervensi dalam FAS1.

Pada peserta FAS1 dan mereka yang berusia ≥ 40 tahun, tingkat perubahan mulut kering pada minggu ke-12 secara signifikan lebih rendah pada kelompok BE dibandingkan pada kelompok Plasebo (Lampiran S5 ). Sebaliknya, tidak ditemukan perbedaan antar kelompok yang signifikan pada peserta FAS1 dan mereka yang berusia < 40 tahun (Lampiran S5 ).

Pada kedua subkelompok, peserta FAS1 dan mereka yang skornya pada rasa kantuk saat bangun berada di atas atau sama dengan median (14,15 poin) pada Scr dan peserta FAS1 dan mereka yang skornya berada di bawah median (14,15 poin) pada Scr, laju perubahan pada minggu ke-12 secara signifikan lebih rendah pada kelompok BE dibandingkan pada kelompok Plasebo (Lampiran S5 ).

Pada subkelompok jenis kelamin, tidak ditemukan perbedaan antarkelompok yang signifikan pada item mana pun (data tidak ditampilkan).

3.4 PSQI-J
Untuk setiap skor, hanya disfungsi siang hari (C7) yang menunjukkan tingkat perubahan yang signifikan lebih tinggi pada minggu ke-12 dalam kelompok BE daripada kelompok Plasebo, dan tidak ditemukan perbedaan antarkelompok yang signifikan untuk item lainnya (data tidak ditampilkan). Mengenai subitem disfungsi siang hari (C7), “Selama bulan lalu, seberapa besar masalah yang Anda hadapi untuk mempertahankan antusiasme yang cukup untuk menyelesaikan sesuatu?”, tingkat perubahan pada minggu ke-12 secara signifikan lebih tinggi pada kelompok BE daripada pada kelompok Plasebo (data tidak ditampilkan). Karena skor dan nilai yang lebih rendah untuk subitem PSQI-J menunjukkan hasil yang lebih baik, efek makanan uji pada kualitas tidur tidak ditentukan oleh PSQI-J.

3.5 POMS2
Tidak ada perbedaan antar-kelompok yang signifikan (data tidak ditampilkan).

3.6 Tes Aliran Darah (Blood Flow)
Tidak ada perbedaan antar-kelompok yang signifikan (data tidak ditampilkan).

3.7 Tes Suhu Permukaan Kulit (Suhu Permukaan Telapak Tangan)
Dalam analisis keseluruhan (FAS3), kelompok BE memiliki AUC suhu permukaan telapak tangan dan suhu permukaan telapak tangan yang jauh lebih tinggi sebelum beban, segera setelah beban, dan 5, 10, 20, dan 30 menit setelah beban air dingin pada 12 minggu dibandingkan kelompok Plasebo (Gambar 4a ). Perbedaan signifikan juga diamati dalam jumlah dan laju perubahan untuk item dan titik waktu yang sama (Lampiran S6 ) tetapi tidak dicatat dalam item lainnya (data tidak ditampilkan).

Efek jenis kelamin pada suhu permukaan kulit juga dievaluasi. Untuk wanita FAS3, kelompok BE memiliki suhu permukaan telapak tangan yang secara signifikan lebih tinggi segera setelah beban air dingin pada minggu ke-12 daripada kelompok Plasebo (Lampiran S7 ). Sebaliknya, untuk pria FAS3, kelompok BE memiliki AUC suhu permukaan telapak tangan dan suhu permukaan telapak tangan yang secara signifikan lebih tinggi sebelum beban, segera setelah beban, dan 5, 10, 20, dan 30 menit setelah beban air dingin pada minggu ke-12 daripada kelompok Plasebo (Gambar 4b ).

Mengenai usia, kelompok BE memiliki AUC suhu permukaan palmar yang signifikan lebih tinggi pada 12w dan suhu permukaan palmar sebelum beban, segera setelah beban, dan 5, 10, 20, dan 30 menit setelah beban air dingin pada 12w dibandingkan kelompok Plasebo hanya pada partisipan FAS3 dan partisipan berusia ≥ 40 tahun (Gambar 4c ).

Mengenai efek kantuk saat bangun, kelompok BE memiliki AUC suhu permukaan palmar yang signifikan lebih tinggi pada 12w dan suhu permukaan palmar sebelum beban, segera setelah beban, dan 20 dan 30 menit setelah beban air dingin pada 12w daripada kelompok Plasebo pada peserta FAS3 dan mereka yang skornya pada kantuk saat bangun berada di bawah median (14,15 poin) pada Scr (Gambar 4d ). Namun, tidak ada perbedaan signifikan pada peserta FAS3 dan mereka yang skornya pada kantuk saat bangun berada di atas atau sama dengan median (14,15 poin) pada Scr (data tidak ditampilkan).

3.8 Tes Tidur
Dalam analisis keseluruhan (FAS4), kelompok BE memiliki tingkat perubahan latensi awal tidur yang jauh lebih rendah pada minggu ke-12 dibandingkan kelompok Plasebo (Tabel 6 ). Tidak ada perbedaan antarkelompok yang signifikan yang diamati untuk parameter atau titik waktu lainnya (data tidak ditampilkan).

TABEL 6. Perbandingan latensi awal tidur dalam uji tidur (FAS4).

Singkatan: 12w, 12 minggu setelah konsumsi; 95% CI, interval kepercayaan 95%; Jumlah perubahan, jumlah perubahan dari Scr; EMM, estimasi rata-rata marginal; FAS4, set analisis lengkap4; Laju perubahan, laju perubahan dari Scr; Scr, penyaringan (sebelum konsumsi); SD, deviasi standar; Δ, Perbedaan antara kelompok (kelompok BE–kelompok plasebo).
* p  < 0,05.

Jenis kelamin, usia, atau rasa kantuk saat bangun pada OSA-MA tidak memengaruhi latensi awal tidur. Dalam analisis subkelompok jenis kelamin, nilai terukur dan jumlah perubahan TST pada minggu ke-12 pada peserta perempuan FAS4 secara signifikan lebih tinggi pada kelompok BE dibandingkan pada kelompok Plasebo; namun, tidak ada perbedaan antarkelompok yang signifikan dalam TST yang diamati pada peserta laki-laki (Tabel 7 ). Pada subkelompok yang berfokus pada rasa kantuk saat bangun, meskipun tidak ada item yang berbeda secara signifikan antara kelompok pada peserta FAS4 dan rasa kantuk saat bangun di atas atau sama dengan median (14,15 poin) pada Scr, peserta FAS4 dan mereka yang rasa kantuknya saat bangun di bawah median (14,15 poin) pada Scr menunjukkan nilai terukur dan jumlah perubahan yang secara signifikan lebih tinggi pada minggu ke-12 untuk total waktu N3 pada kelompok BE dibandingkan pada kelompok Plasebo (Tabel 8 ). Pada subkelompok usia, tidak ada perbedaan antarkelompok yang signifikan yang dicatat untuk item apa pun (data tidak ditampilkan).

TABEL 7. Perbandingan total waktu tidur dalam tes tidur berdasarkan perbedaan jenis kelamin.

Singkatan: 12w, 12 minggu setelah konsumsi; 95% CI, interval kepercayaan 95%; Jumlah perubahan, jumlah perubahan dari Scr; EMM, estimasi rata-rata marginal; FAS4, set analisis lengkap4; Laju perubahan, laju perubahan dari Scr; Scr, penyaringan (sebelum konsumsi); SD, deviasi standar; Δ, Perbedaan antara kelompok (kelompok BE–kelompok plasebo).
* p  < 0,05.

TABEL 8. Perbandingan total waktu N3 dalam uji tidur untuk kualitas tidur yang berbeda.

Singkatan: 12w, 12 minggu setelah konsumsi; 95% CI, interval kepercayaan 95%; Jumlah perubahan, jumlah perubahan dari Scr; EMM, estimasi rata-rata marginal; FAS4, set analisis lengkap4; OSA-MA, inventaris tidur OSA versi MA; Laju perubahan, laju perubahan dari Scr; Scr, penyaringan (sebelum konsumsi); SD, deviasi standar; Δ, Perbedaan antara kelompok (kelompok BE–kelompok plasebo).
* p  < 0,05.

3.9 Tes Darah
Dalam analisis keseluruhan (FAS5), kelompok BE menunjukkan tingkat perubahan TBARS yang jauh lebih rendah pada minggu ke-12 dibandingkan kelompok Plasebo (Tabel 9 ). Tidak ditemukan perbedaan antar kelompok yang signifikan untuk item atau titik waktu lainnya (data tidak ditampilkan).

TABEL 9. Perbandingan zat reaktif asam 2-tiobarbiturat (TBARS).

Singkatan: 12w, 12 minggu setelah konsumsi; 95% CI, interval kepercayaan 95%; Jumlah perubahan, jumlah perubahan dari Scr; EMM, estimasi rata-rata marginal; FAS5, set analisis lengkap5; OSA-MA, inventaris tidur OSA versi MA; Laju perubahan, laju perubahan dari Scr; Scr, penyaringan (sebelum konsumsi); SD, deviasi standar; Δ, Perbedaan antara kelompok (kelompok BE–kelompok plasebo).
* p  < 0,05.

Untuk TBARS, yang menunjukkan perbedaan signifikan dalam analisis keseluruhan, nilai terukur dan jumlah serta laju perubahan pada minggu ke-12 cenderung lebih rendah pada kelompok BE daripada pada kelompok Plasebo hanya pada partisipan perempuan FAS5 mengenai efek jenis kelamin ( p  = 0,051, p  = 0,051, p  = 0,056, berturut-turut; Tabel 9 ). Sedangkan untuk analisis usia, nilai terukur dan jumlah perubahan pada minggu ke-12 cenderung lebih rendah pada kelompok BE daripada pada kelompok plasebo hanya pada partisipan FAS5 dan mereka yang berusia ≥ 40 tahun (keduanya p  = 0,087), dan laju perubahan pada minggu ke-12 secara signifikan lebih rendah pada kelompok BE daripada pada kelompok Plasebo (Tabel 9 ). Mengenai rasa kantuk saat bangun tidur dalam OAS-MA, kelompok BE mencatat nilai terukur yang lebih rendah secara signifikan, dan jumlah perubahan pada minggu ke-12 cenderung lebih rendah dalam kelompok BE dibandingkan kelompok Plasebo pada partisipan FAS5 dan mereka yang rasa kantuknya saat bangun tidur berada di bawah median (14,15 poin) pada Scr (keduanya p  = 0,098), dan laju perubahan pada minggu ke-12 lebih rendah dibandingkan kelompok Plasebo (Tabel 9 ).

3.10 Evaluasi Keselamatan
Selama periode penelitian, tiga kejadian buruk (10,0%) diamati pada kelompok BE dan dua (6,5%) pada kelompok Plasebo (perbedaan kelompok: 3,5%; 95% CI: -10,2% hingga 17,3%). Kejadian buruk yang dilaporkan oleh tiga peserta dalam kelompok BE adalah kutu air, sakit kepala, flu biasa, dan sakit tenggorokan, dan dua peserta dalam kelompok Plasebo melaporkan urtikaria dan jerawat. Semua gejala dianggap oleh dokter penelitian tidak berhubungan secara kausal dengan intervensi makanan.

Selain itu, data urinalisis dan tes darah tidak berbeda secara signifikan antara kelompok (Lampiran S8 ). Selain itu, dokter yang melakukan studi meninjau item penilaian keamanan (pemeriksaan fisik, urinalisis, dan tes darah) menurut kelompok (Lampiran S9–S11 ) dan menurut individu (data tidak ditampilkan), dan tidak ditemukan perubahan yang relevan secara medis terkait dengan konsumsi makanan uji.

4 Diskusi
Proantosianidin dan epikatekin merupakan konstituen utama polifenol yang terdapat dalam BE (Ito et al. 2013 ). Proantosianidin memberikan berbagai efek, seperti aktivitas antioksidan (Ariga 2004 ). Epikatekin merupakan komponen utama katekin dalam teh hijau, dan efek antioksidan merupakan salah satu efek fisiologis katekin (Grzesik et al. 2018 ). Dalam studi crossover acak terhadap 24 relawan Jepang sehat yang menerima BE (100 mg/hari) atau plasebo selama 4 minggu, para peserta melaporkan berkurangnya kelelahan serta kelelahan mata, kantuk, dan modulasi fungsi sistem saraf otonom setelah mengonsumsi makanan yang mengandung BE (Akagi et al. 2021 ). Studi ini meneliti efek konsumsi makanan yang mengandung BE terhadap kualitas tidur pada individu sehat yang tidak puas dengan kualitas tidurnya.

Studi ini mendaftarkan orang Jepang sehat yang mengeluhkan kelelahan saat bangun tidur dan kualitas tidur yang buruk (waktu tidur pendek, sulit tertidur, sulit tidur nyenyak, bermimpi, tidak mampu mengatasi kelelahan, dll.) dalam kehidupan sehari-hari dan memiliki skor yang relatif rendah pada kantuk saat bangun di OSA-MA pada Scr (kelompok BE, 14,2 ± 4,6; kelompok Plasebo, 14,5 ± 4,9, Tabel 3 ). Mengingat bahwa skor kantuk saat bangun di OSA-MA adalah 17,4 ± 7,0 pada 284 pria dan wanita Jepang sehat berusia 26–59 tahun (Yamamoto et al. 1999 ), skor rata-rata kantuk saat bangun pada individu sehat dianggap 17,4 poin. EMM dan 95% CI dari skor kantuk saat bangun pada minggu ke-12 adalah 18,6 poin (95% CI, 17,0 hingga -20,1) untuk kelompok BE dan 15,2 poin (95% CI, 13,7–16,7) untuk kelompok plasebo (Gambar 2a ), yang menunjukkan bahwa hanya kelompok BE yang memiliki skor rata-rata kantuk saat bangun lebih tinggi dari 17,4 poin. Selain itu, nilai terukur dan jumlah perubahan pada minggu ke-12 untuk “Pertanyaan 2_Saya terkonsentrasi–Saya tidak terkonsentrasi,” pada minggu ke-8 dan minggu ke-12 untuk “Pertanyaan 4_Saya rileks–Saya stres,” dan pada minggu ke-12 untuk “Pertanyaan 14_Saya dapat menjawab survei dengan cepat dan mudah sekarang juga–Susah untuk menjawabnya,” yang terkait dengan kantuk saat bangun OSA-MA, secara signifikan lebih tinggi pada kelompok BE dibandingkan pada kelompok Plasebo (Tabel 4 ). Lebih jauh lagi, uji tidur mengungkapkan bahwa perubahan dalam latensi awal tidur secara signifikan lebih rendah pada kelompok BE dibandingkan pada kelompok Plasebo (Tabel 6 ). Penelitian sebelumnya tentang makanan yang menunjukkan sifat antioksidan yang mirip dengan BE mengonfirmasi bahwa asupan asam klorogenat secara signifikan meningkatkan kelelahan saat bangun dan kualitas tidur (Ochiai et al. 2018 ), dan kombinasi asupan Poria Cocos , Ziziphus spinose , dan asam gamma-aminobutyric (GABA) secara signifikan meningkatkan TST dan kualitas tidur (Hao et al. 2024 ). Ochiai et al. ( 2018 ) menunjukkan bahwa asam klorogenat menekan penurunan aktivitas parasimpatis selama tidur dengan bekerja pada sistem saraf otonom, yang menunjukkan bahwa ia berkontribusi untuk meningkatkan kualitas tidur. Karena BE juga telah dikonfirmasi untuk memodulasi fungsi saraf otonom (Akagi et al. 2021 ), BE dapat menunjukkan efek yang sama pada peningkatan kualitas tidur yang mirip dengan asam klorogenat. Hasil kami mendukung penelitian sebelumnya yang menunjukkan bahwa asupan BE menurunkan latensi untuk tertidur dan secara signifikan meningkatkan rasa kantuk saat bangun.

Selain itu, kelompok BE memiliki kadar TBARS yang signifikan lebih rendah daripada kelompok Plasebo dalam laju perubahan dari Scr (Tabel 9 ). TBARS meningkat sebagai respons terhadap stres oksidatif (De Aguilar Diaz Leon dan Borges 2020 ). Dalam sebuah studi terhadap 24 relawan Jepang yang sehat yang menerima BE (100 mg/hari) atau plasebo selama 2 minggu, TBARS menurun secara signifikan dengan konsumsi BE (Akagi et al. 2024 ), dan hasil serupa diperoleh dalam studi saat ini. Otak memproduksi zat bioaktif endogen dengan efek pemicu tidur sebagai respons terhadap pengurangan stres oksidatif (Ikeda et al. 2005 ). Mengingat bahwa konstituen utama BE menunjukkan aktivitas antioksidan, produksi zat aktif fisiologis dengan efek pemicu tidur melalui pengurangan stres oksidatif dianggap bertanggung jawab atas peningkatan kualitas tidur.

Lebih jauh lagi, makanan yang mengandung BE dilaporkan meningkatkan kapasitas produksi NO pada sel endotel vaskular (Akagi et al. 2024 ). NO adalah vasodilator yang mengaktifkan guanilat siklase terlarut (s-GC) dengan mengikat bagian heme dari s-GC pada otot polos vaskular dan menginduksi peningkatan konsentrasi intraseluler guanosin 3′,5′-siklik monofosfat dan penurunan selanjutnya dalam konsentrasi Ca 2+ (Carvajal et al. 2000 ). Dalam sebuah penelitian di mana relawan Jepang yang sehat mengonsumsi BE (100 mg/hari) atau plasebo selama 2 minggu, metabolit NO urin meningkat secara signifikan, dan kadar 8-OhdG dan TBARS (biomarker stres oksidatif) urin menurun secara signifikan (Akagi et al. 2024 ). Studi ini juga menemukan bahwa konsumsi BE secara signifikan mengurangi usia vaskular dan tekanan darah sistolik, dan hasil dari pengukuran gelombang nadi yang dipercepat menunjukkan peningkatan elastisitas vaskular dan tekanan intravaskular (Akagi et al. 2024 ). Dari laporan ini, BE dapat meningkatkan vasodilatasi dan memperbaiki aliran darah melalui peningkatan kapasitas produksi NO; namun, tidak ada perbedaan signifikan dalam metabolit NO yang diidentifikasi dalam studi saat ini (data tidak ditampilkan). Dalam studi saat ini, perbandingan intragroup dari perubahan dari Scr ke 12w dalam kelompok BE dan Plasebo, menggunakan uji- t berpasangan , tidak mengungkapkan perbedaan signifikan dalam kelompok Plasebo; namun, kelompok BE menunjukkan nilai yang secara signifikan lebih tinggi pada 12w daripada pada Scr ( p  = 0,043; data tidak ditampilkan).

Dinginnya tangan dan kaki merupakan gejala berkurangnya aliran darah terminal yang disebabkan oleh penyempitan pembuluh darah di area tersebut (Hur et al. 2012 ; Traynor and MacDermid 2008 ; Yoshino et al. 2013 ). AUC dan nilai terukur dari setiap titik pengukuran, jumlah perubahan, dan laju perubahan secara signifikan lebih tinggi pada kelompok BE dibandingkan pada kelompok Plasebo (Gambar 4 , Lampiran S6 ). Suhu permukaan kulit ujung jari berfluktuasi secara musiman, dan Gardner-Medwin et al. ( 2001 ) mengungkapkan perbedaan 1°C–2°C pada suhu permukaan kulit ujung jari di ruangan selama musim dingin dibandingkan dengan musim panas (suhu luar ruangan; musim panas, sekitar 19°C; musim dingin, sekitar 8°C; suhu ujung jari; musim panas, sekitar 33°C; musim dingin, sekitar 32°C). Dalam studi saat ini, periode intervensi dimulai pada 28 Agustus dan berakhir pada 24 September 2023, dan pemeriksaan 12w dilakukan antara 20 November dan 17 Desember 2023. Rata-rata suhu bulanan tahun 2023 di Tokyo adalah 29,2°C pada bulan Agustus dan 26,2°C pada bulan September, dibandingkan dengan 14,4°C pada bulan November dan 9,4°C pada bulan Desember, yang menunjukkan perbedaan 12°C–20°C antara kedua periode tersebut (Japan Meteorological Agency, nd ). Oleh karena itu, suhu permukaan kulit kemungkinan dipengaruhi oleh variasi musiman. Ketika kami memeriksa jumlah perubahan dari Scr pada suhu permukaan palmar sebelum beban air dingin, penurunan ditemukan pada kedua kelompok: -0,44°C pada kelompok BE dan -1,77°C pada kelompok Plasebo (Lampiran S6 ). Namun, hanya kelompok BE yang menunjukkan variasi musiman yang lebih rendah dari yang disebutkan sebelumnya (1°C–2°C), dan perbedaan signifikan antar kelompok pun teramati, yang menunjukkan bahwa asupan makanan yang mengandung BE meningkatkan suhu permukaan palmar dengan signifikansi klinis.

Suhu tubuh manusia dan tidur saling terkait; suhu kulit punggung tangan dan kaki meningkat relatif terhadap suhu kulit badan sebelum tidur, dan besarnya peningkatan ini berkorelasi positif dengan rasa kantuk (Kräuchi et al. 1999 ). Faktanya, mandi dengan peningkatan sementara pada kulit dan suhu tubuh bagian dalam akan merangsang pusat pengaturan suhu dan selanjutnya meningkatkan aliran darah dalam pembuluh darah tepi pada kulit, yang mengakibatkan peningkatan pembuangan panas dan meningkatkan tidur (Maeda et al. 2023 ). Oleh karena itu, BE mungkin telah meningkatkan vasodilatasi dan meningkatkan suhu kulit melalui peningkatan kapasitas produksi NO, sehingga mengurangi latensi awal tidur dan secara signifikan meningkatkan rasa kantuk saat bangun.

“Health Japan 21 (periode ketiga)” bertujuan untuk meningkatkan persentase orang yang cukup istirahat dari tidur, dan indikatornya dianggap sebagai rasa istirahat mereka dari tidur (Kementerian Kesehatan Tenaga Kerja dan Kesejahteraan 2023 ). Studi ini juga mengevaluasi introspeksi tidur saat bangun tidur, dan peningkatan rasa kantuk saat bangun tidur dikonfirmasi, yang menunjukkan bahwa asupan BE mungkin telah meningkatkan rasa istirahat saat tidur sebagaimana didefinisikan oleh Health Japan 21 (istilah ketiga). Oleh karena itu, makanan yang mengandung BE dianggap berkontribusi untuk “meningkatkan persentase orang yang cukup istirahat setelah tidur,” salah satu tujuan Health Japan 21 (istilah ketiga).

Dalam studi ini, tidak ditemukan perbedaan signifikan dalam produksi metabolit NO antara kelompok BE dan plasebo. Dalam sebuah studi yang menyelidiki hubungan antara kebiasaan merokok dan produksi NO, laju produksi NOX, suatu metabolit NO, secara signifikan lebih rendah pada perokok dibandingkan pada bukan perokok (Grassi et al. 2010 ). Selain itu, sebuah studi terhadap 30 pria berusia 30-an–40-an yang mengonsumsi teh hijau yang mengandung 0, 80, atau 580 mg katekin selama 2 minggu mengungkapkan peningkatan signifikan pada kadar NOX dalam kelompok yang mengonsumsi 580 mg katekin dibandingkan dengan sebelum konsumsi (Oyama et al. 2010 ). Dalam sebuah studi yang memperkirakan asupan harian katekin utama pada 146 peserta yang paling sering minum teh hijau di rumah, asupan katekin bervariasi dari rata-rata 481,0 mg hingga maksimum 2722,9 mg dan minimum 0 mg (Takahashi et al. 2004 ). Dalam penelitian ini, kriteria eksklusi adalah larangan konsumsi alkohol berlebihan dan asupan makanan dan minuman yang mengandung bahan-bahan yang dianggap dapat memengaruhi tidur. Namun, kebiasaan merokok dan asupan katekin, yang dapat memengaruhi metabolisme NO yang terkait dengan mekanisme kerja BE, tidak dianggap sebagai faktor. Dalam penelitian selanjutnya, analisis faktor-faktor ini akan memungkinkan kita untuk mengonfirmasi efek asupan makanan terhadap jumlah metabolit NO dan memeriksa efek BE terhadap kualitas tidur secara lebih komprehensif.

“Bahu kaku” dan “kelelahan mata” dalam kuesioner asli membaik secara signifikan pada kelompok Placebo dibandingkan dengan kelompok BE pada beberapa titik evaluasi setelah intervensi (Lampiran S4 ). Namun, penelitian ini melibatkan individu sehat yang mengeluhkan kelelahan saat bangun tidur dan kualitas tidur yang buruk (waktu tidur pendek, sulit tertidur, sulit tidur nyenyak, bermimpi, tidak mampu mengatasi kelelahan, dll.) dan tidak mempertimbangkan tingkat keparahan bahu kaku dan kelelahan mata pada Scr. Oleh karena itu, perbedaan derajat gejala bahu kaku dan kelelahan mata pada Scr mungkin memengaruhi hasil penelitian.

Analisis subkelompok dilakukan untuk memeriksa lebih komprehensif efek asupan BE pada kualitas tidur. Pertama, mengingat perbedaan jenis kelamin dalam kualitas tidur (Mander et al. 2017 ), subkelompok pria dan wanita dibangun untuk memastikan efek jenis kelamin pada kualitas tidur. Pada subkelompok pria, nilai terukur dan perubahan skor kantuk saat bangun di OSA-MA secara signifikan lebih tinggi pada kelompok BE daripada pada kelompok Plasebo (Gambar 3a ). Selain itu, “Pertanyaan 2_Saya terkonsentrasi–Saya tidak terkonsentrasi,” “Pertanyaan 4_Saya rileks–Saya stres,” “Pertanyaan 8_Saya merasa jernih–Saya merasa pusing,” dan “Pertanyaan 14_Saya dapat menjawab survei dengan cepat dan mudah sekarang–Sulit untuk menjawabnya” (Organisasi Jepang untuk Tidur yang Lebih Baik, nd ) terdiri dari kantuk saat bangun. Perbedaan signifikan diamati pada pertanyaan 2, 8, dan 14 untuk subkelompok pria (Tabel 5 ), dengan kelompok BE memiliki nilai lebih tinggi daripada kelompok Plasebo. Makanan yang mengandung BE diharapkan dapat meningkatkan rasa kantuk saat bangun tidur dengan meningkatkan suhu kulit melalui peningkatan produksi NO; memang, peningkatan signifikan pada suhu permukaan telapak tangan sebelum beban air dingin diamati pada kelompok BE (Gambar 4b) ), yang menunjukkan bahwa BE dapat meningkatkan rasa kantuk melalui mekanisme yang diharapkan pada pria.

Sebaliknya, tidak ada perbedaan signifikan yang diamati dalam rasa kantuk saat bangun di antara peserta perempuan (Gambar 3b ), meskipun skor pada pertanyaan 4 OSA-MA secara signifikan lebih tinggi (Tabel 5 ). Namun, tren peningkatan diamati dalam skor tidur dalam uji tidur ( p  = 0,071, data tidak ditampilkan), dan TST secara signifikan lebih tinggi dalam kelompok BE daripada dalam kelompok Plasebo (Tabel 7 ). Sasaran dari “Health Japan 21 (istilah ketiga)” yang terkait dengan istirahat dan tidur adalah untuk meningkatkan jumlah orang yang cukup tidur (tidur 6–9 jam) (Kementerian Kesehatan Tenaga Kerja dan Kesejahteraan 2023 ). Perempuan cenderung tidur lebih pendek daripada laki-laki, dan dalam penelitian ini, TST untuk peserta perempuan menunjukkan rata-rata 19.471,5 detik (sekitar 5,4 jam) pada Scr dalam kelompok BE dan 20.551,1 detik (sekitar 5,7 jam) dalam kelompok Plasebo. Setelah intervensi, pada partisipan perempuan, EMM pada minggu ke-12 adalah 21.837,8 detik (sekitar 6,1 jam) pada kelompok BE dan 19.028,8 detik (sekitar 5,3 jam) pada kelompok Plasebo (Tabel 7 ), yang mengindikasikan bahwa target 6 jam (21.600 detik) dari Health Japan 21 (istilah ketiga) tercapai hanya pada kelompok BE (Tabel 7 ). Menurut hasil survei terhadap 5.701 warga Jepang (2.668 laki-laki dan 3.033 perempuan) berusia ≥ 20 tahun pada rata-rata waktu tidur harian (Kementerian Kesehatan, Tenaga Kerja, dan Kesejahteraan 2019 ), 37,5% laki-laki dan 40,6% perempuan melaporkan tidur < 6 jam, yang mengindikasikan bahwa peningkatan signifikan pada waktu tidur dianggap sebagai perubahan yang berarti bagi perempuan. Dengan demikian, makanan yang mengandung BE efektif dalam mengurangi rasa kantuk saat bangun tidur bagi pria dan meningkatkan durasi tidur bagi wanita.

Pada partisipan berusia ≥ 40 tahun, yang diorganisasikan untuk memeriksa efek penuaan pada kualitas tidur, kelompok BE memiliki skor yang signifikan lebih tinggi pada pertanyaan 8 dan 14 OSA-MA, yang merupakan komponen kantuk saat bangun, daripada kelompok Plasebo (Tabel 5 ). Dalam pengukuran suhu permukaan palmar, AUC dan suhu permukaan palmar pada semua titik waktu pengukuran dari sebelum dan segera setelah beban air dingin hingga 30 menit setelah beban air dingin secara signifikan lebih tinggi pada kelompok BE daripada pada kelompok plasebo (Gambar 4c ). Hasil ini mencerminkan bahwa BE mungkin telah meningkatkan kualitas tidur melalui peningkatan suhu permukaan kulit. Selain itu, laju perubahan TBARS, penanda stres oksidatif, secara signifikan lebih rendah pada kelompok BE daripada pada kelompok Plasebo (Tabel 9 ), dan hasil ini mendukung data sebelumnya (Ariga 2004 ; Namba 2018 ; Wang et al. 1997 ; Yoshioka et al. 2017 ). Penurunan produksi saliva terkait usia pada orang dewasa setengah baya dan lebih tua (Smith et al. 2013 ; Xu et al. 2019 ) meningkatkan jumlah individu yang mengeluh mulut kering (xerostomia) (Ohara et al. 2016 ). Gejala mulut kering mencakup kualitas tidur yang buruk terkait dengan sensasi mulut kering di malam hari (Burgess 2014 ). Karena penurunan kualitas tidur pada PSQI pada pasien dengan mulut kering (Lopez-Jornet et al. 2016 ), meringankan mulut kering mungkin penting untuk meningkatkan kualitas tidur. Dalam studi ini, kuesioner asli menunjukkan tingkat perubahan mulut kering yang signifikan lebih rendah pada kelompok BE dibandingkan pada kelompok Plasebo (Lampiran S5 ). Karena komponen air saliva dipasok dari plasma dalam pembuluh darah, sekresi saliva memerlukan peningkatan aliran darah di kelenjar saliva (Izumi dan Karita 1994 ; Mizuta et al. 2000 ). Dalam kuesioner asli, “mulut kering” diperkirakan berkurang karena peningkatan sekresi air liur melalui aliran darah, yang meningkatkan efek BE yang terkandung dalam makanan uji.

Gejala menopause meliputi insomnia (Terauchi et al. 2012 ) dan mulut kering (Meurman et al. 2009 ). Wanita premenopause memiliki volume saliva yang lebih banyak secara signifikan dalam situasi non-stimulasi dibandingkan wanita postmenopause (Streckfus et al. 1998 ). Sebuah studi yang mengevaluasi faktor-faktor yang memengaruhi kualitas tidur pada wanita berusia 35–49 tahun menemukan hubungan yang signifikan dengan kecemasan, depresi, dan asupan kafein pada keseluruhan populasi. Studi ini melaporkan bahwa kadar estradiol yang lebih rendah secara signifikan terkait dengan kualitas tidur yang lebih rendah pada wanita berusia ≥ 45 tahun (Hollander et al. 2001 ). Dalam studi ini, tidak ada perbedaan signifikan dalam kualitas tidur dan mulut kering yang dicatat pada subkelompok wanita dari semua usia, sedangkan perbedaan signifikan dalam kualitas tidur dan mulut kering diamati pada subkelompok mereka yang berusia ≥ 40 tahun. Penurunan hormon wanita yang terkait dengan menopause diasumsikan memengaruhi kualitas tidur dan mulut kering; memang, wanita berusia < 40 tahun tidak menunjukkan perubahan signifikan pada parameter tersebut (data tidak ditampilkan). Dengan demikian, BE mungkin berguna bagi wanita menopause. Namun, mengingat jumlah peserta yang sedikit, hipotesis ini perlu diverifikasi di masa mendatang.

Lebih jauh lagi, dalam subkelompok peserta yang skornya dalam rasa kantuk saat bangun di OSA-MA berada di bawah median (14,15 poin) pada Scr, rasa kantuk saat bangun di OSA-MA secara signifikan lebih tinggi pada 8 minggu ( p  = 0,038) dan menunjukkan tren peningkatan pada 12 minggu ( p  = 0,060) pada kelompok BE dibandingkan pada kelompok plasebo (Gambar 3f ). Untuk pengukuran suhu permukaan palmar, AUC dan nilai aktual serta perubahan pada 12 minggu pada suhu permukaan palmar sebelum beban air dingin pada kelompok BE secara signifikan lebih tinggi dibandingkan dengan kelompok plasebo (Gambar 4d ). Dalam uji tidur, total waktu N3 pada 12 minggu secara signifikan lebih tinggi pada kelompok BE dibandingkan pada kelompok Plasebo (Tabel 8 ). Pada manusia, tidur terdiri dari siklus tidur REM dan non-REM bergantian yang berlangsung sekitar 80–100 menit masing-masing (Carskadon dan Dement 2011 ). Tahap N3, tidur nyenyak, sering muncul di paruh pertama tidur. Namun, N3 menurun seiring bertambahnya usia, disertai dengan peningkatan di tengah-bangun dan tidur dangkal (Carskadon dan Dement 2011 ). Lebih jauh lagi, N3 berkurang lebih signifikan dengan 0% pada kasus sleep apnea yang serius, sedangkan rasio N3 terhadap waktu tidur adalah 20% pada usia 20-an dan 5% pada usia 60-an (Geyer dan Carney 2018 ). Mengingat laporan-laporan ini, N3 (total waktu N3) kemungkinan menurun dalam analisis subkelompok ini, karena mencakup peserta yang dianggap memiliki kualitas tidur yang buruk. Rata-rata total waktu N3 di Scr dari semua peserta FAS4 adalah 2622,8 d (data tidak ditampilkan). Dalam subkelompok dengan rasa kantuk saat naik di bawah median, itu adalah 2171,8 detik dalam kelompok BE dan 2092,0 detik dalam kelompok Plasebo (Tabel 8 ), yang menunjukkan bahwa subkelompok dengan rasa kantuk saat naik di bawah median memiliki total waktu N3 yang lebih sedikit. Hasil ini menunjukkan bahwa total waktu N3 lebih sensitif terhadap peningkatan kualitas tidur yang terkait dengan asupan makanan yang mengandung BE oleh mereka yang memiliki kualitas tidur yang buruk. Selain itu, laju perubahan “mulut kering” pada 12 minggu secara signifikan lebih rendah dalam kelompok BE daripada dalam kelompok Plasebo (Lampiran S5 ). Rasa haus yang meningkat menyebabkan terbangun untuk asupan air (Lavigne et al. 1999 ; Thie et al. 2002 ) dan menurunkan kualitas tidur. BE meningkatkan pembuangan panas pada kulit (Maeda et al., 2023 ) dan sekresi saliva (Izumi dan Karita, 1994 ; Mizuta et al., 2000 ) dengan meningkatkan aliran darah pada pembuluh darah tepi kulit dan meningkatkan kualitas tidur pada mereka yang memiliki kualitas tidur buruk dengan meningkatkan rasa kantuk saat bangun dan total waktu N3, indikator tidur nyenyak.

Dalam studi ini, dua alasan dipertimbangkan untuk kurangnya perbedaan signifikan dalam aliran darah meskipun ada perbedaan signifikan dalam suhu permukaan kulit telapak tangan: (1) perbedaan di lokasi pengukuran dan (2) batas deteksi perangkat pengukuran. Mengenai alasan pertama, suhu permukaan palmar dievaluasi di area telapak tangan, sedangkan laju aliran darah diukur pada seluruh tangan (dari pergelangan tangan ke ujung jari), dan satu lokasi dipilih dari punggung tangan untuk analisis. Suhu permukaan kulit berbeda di antara daerah tubuh. Dalam sebuah studi oleh Nishihara dan Hasebe ( 2003 ), delapan siswi sehat (berusia 22,1 ± 0,6 tahun) terpapar udara dingin di dada, toraks, punggung tengah, pergelangan tangan atas, pergelangan tangan anterior, paha, dan tungkai bawah, dan suhu permukaan kulit di dada, toraks, punggung tengah, pergelangan tangan atas, pergelangan tangan anterior, paha, tungkai bawah, dahi, perut, punggung tangan, jari-jari terlebih dahulu, punggung kaki, dan jari-jari kaki diselidiki. Perubahan suhu permukaan kulit maksimum dan minimum setelah 40 menit paparan dingin adalah -0,52°C dan -0,87°C, masing-masing, untuk punggung tangan (Nishihara dan Hasebe 2003 ). Meskipun lokasi pengukuran dalam studi Nishihara dan Hasebe ( 2003 ) adalah punggung tangan, yang berbeda dari lokasi pengukuran dalam studi saat ini, perbedaan lokasi tubuh yang diukur mungkin telah memengaruhi suhu permukaan kulit dan aliran darah dalam studi ini. Mengenai alasan kedua, yaitu, batas deteksi perangkat pengukuran, flowmeter darah bintik laser digunakan dalam studi ini. Ketika cahaya yang selaras fase seperti cahaya laser disinari ke permukaan kasar, pola bintik (pola kasar) diamati (Briers 2007 ). Ketika sinar laser disinari ke objek yang tidak bergerak, pola bintik tidak berubah, sedangkan ketika sinar laser disinari ke objek yang bergerak, pola bintik berubah tergantung pada kecepatan gerakan objek (OMEGAWAVE Inc., nd ). Pengukur aliran darah bintik laser menghitung aliran darah berdasarkan pola bintik yang dihasilkan oleh sinar laser yang menyinari kulit dan memantul dari sel darah merah (OMEGAWAVE Inc., nd ) dan dapat mengukur aliran darah di kulit hingga kedalaman ≤ 1 mm (Kashima 2003 ). Sebaliknya, pengukur aliran darah Doppler laser menghitung aliran darah dari hasil kali jumlah sel darah merah dan kecepatan aliran darah menggunakan perubahan frekuensi (efek Doppler) ketika sinar laser mengenai objek (terutama sel darah merah) yang bergerak di kapiler dan dapat mengukur aliran darah di kapiler pada kedalaman sekitar 0,5 mm dari permukaan kulit (Clough et al. 2009)). Meskipun prinsip-prinsip laser speckle dan laser Doppler blood flowmetries sedikit bervariasi, hasil pengukuran dilaporkan secara umum sebanding (Briers 1996 ). Rata-rata dari beberapa pengukuran harus digunakan untuk kuantifikasi dengan laser Doppler blood flowmetri (Bray et al. 2003 ). Seperti disebutkan di atas, dalam penelitian ini, pengukuran aliran darah dilakukan pada seluruh tangan dari pergelangan tangan ke ujung jari, dan analisis dilakukan dengan menggunakan nilai rata-rata dalam lingkaran yang diatur untuk mencakup sebagian besar punggung tangan. Meskipun tidak ada publikasi yang merekomendasikan beberapa titik pengukuran untuk laser speckle blood flowmetri, analisis hanya satu titik tidak mencerminkan perubahan aliran darah yang disebabkan oleh asupan makanan yang mengandung BE. Lebih jauh lagi, karena kedalaman pengukuran laser speckle blood flowmeter dibatasi hingga 1 mm (Kashima 2003 ), bahkan titik-titik yang dianalisis mungkin tidak mencerminkan perubahan aliran darah di daerah yang lebih dalam. Karena dua alasan ini, perubahan aliran darah yang terkait dengan asupan makanan yang mengandung BE tidak diamati dalam penelitian ini.

Salah satu keterbatasan studi kami adalah kami tidak dapat sepenuhnya mengesampingkan kemungkinan bahwa berat badan dan komposisi tubuh dapat memengaruhi penyerapan BE. Polifenol utama dalam BE adalah epikatekin, prosianidin B2, prosianidin C1, dan cinnamtannin A2 (Tabel 1 ). Dalam sebuah studi yang meneliti perbedaan dalam fisiokinetik katekin antara tikus normal dan obesitas, tikus obesitas menunjukkan konsentrasi epikatekin yang secara signifikan lebih tinggi dalam isi usus halus dan feses daripada tikus normal, yang menunjukkan bahwa epikatekin yang masuk ke dalam tubuh berkurang pada tikus obesitas (Liu et al. 2024 ). Dengan demikian, penyerapan BE mungkin berbeda pada manusia tergantung pada tingkat obesitas. Namun, tidak ada uji klinis yang dilakukan mengenai efek obesitas pada penyerapan BE. Oleh karena itu, penyelidikan apakah tingkat obesitas memengaruhi penyerapan BE pada manusia harus ditangani dalam studi mendatang.

5 Kesimpulan
Studi ini meneliti efek konsumsi BE pada kualitas tidur pada orang dewasa Jepang yang sehat yang tidak puas dengan kualitas tidur mereka. Hasil utama, kantuk saat bangun tidur pada OSA-MA pada minggu ke-12, secara signifikan lebih tinggi pada kelompok BE daripada pada kelompok Plasebo, yang menunjukkan bahwa asupan makanan yang mengandung BE secara signifikan meningkatkan kualitas tidur. Dibandingkan dengan kelompok Plasebo, kelompok BE memiliki latensi awal tidur yang secara signifikan lebih pendek, menghilangkan sensasi mulut kering, dan meningkatkan suhu permukaan palmar. Analisis subkelompok menunjukkan bahwa BE secara efektif mengurangi kantuk saat bangun tidur untuk pria dan meningkatkan waktu tidur untuk wanita. Selain itu, peserta berusia ≥ 40 tahun mengalami perbaikan penurunan kualitas tidur dan mulut kering terkait usia, dan peserta dengan kualitas tidur yang buruk mengalami pengurangan kantuk saat bangun tidur dan peningkatan tidur nyenyak. Konsumsi BE aman dalam kondisi studi ini.