Abstrak
Kadar tinggi asilkarnitin rantai panjang yang berasal dari asam lemak merugikan kesehatan jantung, terutama karena efek buruknya pada fungsi mitokondria dan jalur metabolisme utama di jantung. Sementara asam lemak trans dianggap berbahaya dan asam lemak tak jenuh ganda (PUFA) omega-3 dianggap bermanfaat, sifat spesifik asilkarnitin yang berasal dari jenis asam lemak ini tidak dijelaskan. Penelitian ini bertujuan untuk membandingkan efek palmitoilkarnitin jenuh (PC), cis-oleoilkarnitin tak jenuh tunggal (cis-OC), trans-elaidoilkarnitin (trans-EC), dan eicosapentaenoylcarnitine tak jenuh ganda (EPAC) dan docosahexaenoylcarnitine (DHAC) pada fungsi jantung, viabilitas sel jantung, fungsionalitas mitokondria, dan jalur pensinyalan insulin. Asilkarnitin jenuh dan tak jenuh tunggal, khususnya trans-EC, secara signifikan mengurangi kontraktilitas jantung pada konsentrasi 8–12 μM, dan trans-EC diidentifikasi sebagai asilkarnitin yang paling kardiotoksik. Sebaliknya, keberadaan EPAC dan DHAC dalam buffer perfusi tidak mengganggu fungsi jantung. Asilkarnitin jenuh dan tak jenuh tunggal juga secara drastis mengurangi viabilitas sel H9C2 dan menekan OXPHOS mitokondria hingga 70% pada 25 μM, sedangkan asilkarnitin yang berasal dari PUFA hanya menyebabkan penurunan OXPHOS sebesar 20%–25% dan tidak menurunkan viabilitas sel. Lebih jauh, PC, cis-OC, dan trans-EC secara signifikan menghambat fosforilasi Akt, sedangkan EPAC dan DHAC memiliki efek yang jauh lebih lemah pada pensinyalan insulin. Sebagai kesimpulan, asilkarnitin jenuh dan tak jenuh tunggal, khususnya trans-EC, memberikan efek kardiotoksik yang signifikan, terutama melalui gangguan fungsi mitokondria jantung. Asilkarnitin turunan asam lemak omega-3 PUFA EPAC dan DHAC aman dan kecil kemungkinannya merusak mitokondria jantung, sel jantung, dan jantung dibandingkan asilkarnitin lainnya. Asupan PUFA mungkin lebih aman daripada sumber lipid lain yang mengandung asam lemak rantai panjang pada pasien dengan FAOD dan penyakit kardiometabolik.

Singkatan
Bertindak
protein kinase B
AMPK
Protein kinase yang diaktifkan AMP
Bab 18:0
stearoil karnitin
Bab 18:2
linoleilkarnitin
C2
asetilkarnitin
cis-OC
cis-oleoilkarnitin
CPT
karnitin palmitoiltransferase
DEKR
2,4-dienoyl-CoA reduktase
Asam lemak tak jenuh (DHA)
asam dokosaheksaenoat
DHAK
dokosaheksaenoilkarnitin
Bahasa Indonesia: DMEM
Dulbecco yang dimodifikasi Eagle’s medium
Asam EDTA
asam etilendiamintetraasetat
Badan Perlindungan Lingkungan (EPA)
asam eikosapentaenoat
EPAC
eicosapentaenoylcarnitine
Bahasa Indonesia: FABP3
protein pengikat asam lemak 3
Organisasi Pangan dan Pertanian (FAO)
oksidasi asam lemak
Bahasa Inggris
gangguan oksidasi asam lemak
LVDP
tekanan ventrikel kiri berkembang
OKSFO
fosforilasi oksidatif
komputer
palmitoil karnitin
PUFA
asam lemak tak jenuh ganda
ROS
spesies oksigen reaktif
SEJARAH
kesalahan standar rata-rata
lintas-EC
trans-elaidoylkarnitin
UPLC/MS/MS
kromatografi cair kinerja ultra yang digabungkan dengan spektrometri massa tandem
WGA
aglutinin bibit gandum
1. PENDAHULUAN
Hampir semua asam lemak dapat diubah menjadi asilkarnitin, dan kelimpahannya biasanya bergantung pada jumlah asam lemak yang tersedia dalam jaringan. 1 Bahkan asam lemak yang hanya dimetabolisme dalam peroksisom dapat diubah menjadi asilkarnitin. 2 , 3 Asilkarnitin rantai panjang yang paling melimpah adalah palmitoilkarnitin (PC, C16:0) dan oleoilkarnitin (OC, C18:1), dengan konsentrasi rata-rata dalam darah manusia dan hewan berkisar antara 100 hingga 150 nM dan 150 hingga 250 nM, masing-masing. Demikian pula, di jantung, kandungan PC dan OC adalah yang tertinggi di antara asilkarnitin rantai panjang, sedangkan konsentrasi stearoilkarnitin (C18:0) dan linoleilkarnitin (C18:2) dalam plasma dan jantung 2–10 kali lebih rendah daripada konsentrasi PC dan OC. Asilkarnitin rantai panjang lainnya ditemukan pada kadar yang jauh lebih rendah. Penelitian sebelumnya tentang asilkarnitin rantai panjang terutama berfokus pada PC dan OC, sedangkan asilkarnitin rantai panjang lainnya kurang diteliti.

Suplemen yang mengandung asam lemak tak jenuh ganda (PUFA) omega-3 yang berasal dari ikan digunakan secara luas karena manfaatnya bagi kesehatan, dan eicosapentaenoic (EPA, 20:5, n-3) dan docosahexaenoic (DHA, 22:6, n-3) disarankan sebagai PUFA omega-3 yang paling bermanfaat. 4 – 6 Meta-analisis uji klinis menunjukkan bahwa terapi suplementasi EPA dan DHA dikaitkan dengan pengurangan yang signifikan dalam kejadian kardiovaskular, mortalitas, dan risiko penyakit jantung. 7 Beberapa penelitian telah menemukan bahwa monoterapi EPA lebih bermanfaat dibandingkan dengan terapi gabungan EPA dan DHA. 8 – 10 PUFA dimetabolisme dalam mitokondria; oleh karena itu, EPA dan DHA akan membentuk asilkarnitin yang sesuai, yaitu eicosapentaenoylcarnitine (EPAC) dan docosahexaenoic acylcarnitine (DHAC). Karena suplementasi asam lemak omega-3 PUFA dapat meningkatkan kadar PUFA beberapa kali lipat, penting untuk memahami efek asilkarnitin yang berasal dari PUFA. Asupan asam lemak trans telah dikaitkan dengan peningkatan risiko penyakit jantung 11 ; namun, mekanisme yang mendasari peningkatan risiko ini belum sepenuhnya dipahami. Agaknya, perbedaan toksisitas cis-OC alami dan trans-elaidoylcarnitine (trans-EC) yang berasal dari asam elaidat tak jenuh tunggal dapat menjelaskan perbedaan ini.

Karnitin palmitoiltransferase (CPT)1 dalam mitokondria mengkatalisis sintesis asilkarnitin rantai panjang dari karnitin dan asil-CoA rantai panjang dan memainkan peran penting dalam oksidasi asam lemak rantai panjang dalam mitokondria. 1 , 12 Sebagai bagian dari adaptasi terhadap perubahan nutrisi, aktivitas CPT1 diatur oleh jalur protein kinase yang diaktifkan AMP (AMPK) dan Protein kinase B (Akt) melalui perubahan konsentrasi malonil-CoA. 12 Namun, laju sintesis asilkarnitin rantai panjang tidak bergantung pada status metabolik dan fungsional mitokondria. Selain itu, ketika katabolisme mitokondria asilkarnitin dibatasi oleh β-oksidasi yang digabungkan dengan CPT2, CPT1 tidak dihambat tetapi diaktifkan. Dengan demikian, produksi asilkarnitin yang berlebihan dalam kombinasi dengan β-oksidasi yang terbatas menyebabkan akumulasi asilkarnitin rantai panjang. 13 Di dalam sel, kandungan tertinggi asilkarnitin rantai panjang terdapat di ruang antarmembran mitokondria 13 ; namun, asilkarnitin juga dapat keluar dari mitokondria dan menimbulkan efek kerusakan pada kompartemen sel lainnya.

Akumulasi asilkarnitin rantai panjang merupakan pendorong penting kerusakan jantung selama iskemia-reperfusi, gagal jantung, dan kelainan oksidasi asam lemak bawaan. 13 – 16 Baru-baru ini, asilkarnitin rantai panjang terbukti berkontribusi terhadap kerusakan mitokondria dan produksi ROS di otak selama stroke. 17 Mekanisme mitokondria yang terkait dengan kerusakan kardiomiosit meliputi penghambatan fosforilasi oksidatif mitokondria (OXPHOS) dan metabolisme piruvat. 1 , 13 , 18 – 20 Selain itu, asilkarnitin rantai panjang menghambat jalur pensinyalan insulin 21 dan mengubah homeostasis kalium dan kalsium. 22 Kerusakan mitokondria dan efek merugikan lainnya dari asilkarnitin menyebabkan kematian sel apoptosis melalui aktivasi jalur kaspase. 14 , 23 Kerusakan terkait pada sel jantung diminimalkan oleh pengikatan asilkarnitin rantai panjang ke protein pengikat asam lemak intraseluler 3 (FABP3), sehingga mengurangi fraksi asilkarnitin yang tidak terikat. Namun, kapasitas pengikatan asilkarnitin rantai panjang FABP3 terbatas jika kadar asam lemak meningkat. 13 , 24 Secara keseluruhan, kelebihan asilkarnitin rantai panjang berkontribusi terhadap krisis energi di miokardium, mengurangi kontraktilitas, dan memicu aritmia jantung.

Dalam penelitian ini, kami membandingkan efek asilkarnitin yang berasal dari PC jenuh, bentuk cis dan trans dari OC tak jenuh tunggal, dan EPAC dan DHAC tak jenuh ganda pada mitokondria, sel jantung, dan fungsi jantung.

2 BAHAN DAN METODE
2.1 Sintesis asilkarnitin
Acylcarnitines disintesis dari L-karnitin dan asil klorida yang sesuai melalui protokol yang dimodifikasi (lihat Lampiran S1 ) seperti yang dijelaskan dalam literatur. 24 , 25

2.2 Hewan percobaan
Empat puluh lima tikus jantan dewasa (berusia 8–12 minggu) C57BL/6N (Envigo, Belanda) ditempatkan dalam kondisi standar (21–23°C, siklus terang/gelap 12 jam terbalik, kelembapan relatif 45%–65%) dengan akses tak terbatas ke makanan (diet R70 dari Lantmännen) dan air, dengan periode aklimatisasi minimal 1 minggu. Penelitian dilakukan hanya pada tikus jantan untuk menghilangkan kemungkinan efek pengganggu dari hormon reproduksi. Prosedur eksperimen dilakukan sesuai dengan pedoman Komunitas Eropa dan undang-undang serta kebijakan setempat (Direktif 2010/63/EU), dan semua prosedur disetujui (Izin 132, 2022) oleh Dinas Makanan dan Kedokteran Hewan, Riga, Latvia. Penelitian yang melibatkan hewan dilaporkan sesuai dengan pedoman ARRIVE. 26

2.3 Penentuan profil asilkarnitin dan kandungan asam lemak tak jenuh ganda
Profil asilkarnitin ditentukan menggunakan kromatografi cair kinerja tinggi yang digabungkan dengan spektrometri massa tandem (UPLC/MS/MS) mengikuti protokol yang telah ditetapkan sebelumnya 25 dengan beberapa modifikasi. Ekstrak jantung disiapkan dengan menghomogenkan jaringan dalam larutan KH 2 PO 4 yang dibuffer (pH 4,9), diikuti dengan deproteinisasi dengan campuran asetonitril dan metanol dan sentrifugasi berikutnya (rasio berat terhadap volume akhir 1:15). Supernatan kemudian diencerkan 20 kali dengan larutan asetonitril/metanol 3:1 (v/v) dan dianalisis melalui UPLC/MS/MS.

Konsentrasi asam lemak tak jenuh ganda (PUFA) nonesterifikasi dan asilkarnitin turunan PUFA dalam sampel jantung tikus juga ditentukan menggunakan UPLC/MS/MS. Mode elektrospray ion positif digunakan untuk mendeteksi asilkarnitin turunan PUFA, dan mode ion negatif digunakan untuk mendeteksi PUFA. Pemisahan UPLC dilakukan pada kolom Acquity BEH C18 (2,1 × 50 mm, 1,7 μm, Waters) menggunakan sistem UPLC Waters Acquity dengan fase gerak gradien dari 40% B hingga 90% B, dengan pelarut A yang terdiri dari 2 mM amonium asetat (pH 4) dan pelarut B yang terdiri dari asetonitril. Analisis MS/MS dilakukan pada instrumen mikro Micromass Xevo TQ-S (Waters) dalam mode pemantauan reaksi ganda, dengan transisi ion prekursor-ke-produk berikut: m/z 301 → m/z 257 untuk EPA, m/z 327 → m/z 283 untuk DHA, m/z 446 → m/z 85 untuk EPAC, dan m/z 472 → m/z 85 untuk DHAC. Nilai tegangan kerucut dan energi tumbukan dioptimalkan untuk setiap senyawa. Akuisisi dan pemrosesan data dilakukan menggunakan perangkat lunak MassLynx V4.2 dengan modul TargetLynx XS (Waters).

2.4 Jantung terisolasi
Efek asilkarnitin rantai panjang jenuh dan tak jenuh pada fungsi jantung dipelajari dalam model jantung tikus ex vivo. Jantung diisolasi menurut teknik Langendorff seperti yang dijelaskan sebelumnya 27 dengan sedikit modifikasi. Secara singkat, tikus C57BL6 dibius dengan natrium pentobarbital (70 mg/kg) dan heparin. Setelah hilangnya refleks jepit ekor dan pedal, toraks dibuka, dan hewan dikorbankan dengan mengangkat jantung dan paru-paru. Jantung dan paru-paru segera direndam dalam buffer Krebs–Henseleit sedingin es hingga jantung mendingin dan berhenti berdetak. Jaringan di sekitarnya dikeluarkan dari jantung, dan jantung dipasang dalam sistem Langendorff (ADInstruments) dalam waktu 2 menit setelah pengangkatan. Jantung diperfusi secara retrograd dengan penyangga Krebs–Henseleit yang mengandung oksigen (95% O2, 5% CO2) yang dilengkapi dengan glukosa 10 mM (Fresenius Kabi) dan BSA 0,3% (bebas FA) (Life Science Production LSG Ltd.) pada tekanan perfusi konstan 70 mmHg. Tabung kateter sepanjang sepuluh milimeter dengan diameter 0,7 mm dimasukkan ke dinding apeks ventrikel kiri untuk memastikan drainase cairan. Balon yang diisi dengan campuran air–etanol (1:1) dan dihubungkan ke transduser tekanan fisiologis (ADInstruments) dimasukkan ke ventrikel kiri, dan tekanan akhir diastolik dasar ditetapkan pada 5–10 mmHg. Setelah periode adaptasi selama 20 menit, ketika semua parameter fungsi jantung (detak jantung, tekanan ventrikel kiri yang terbentuk, aliran koroner, kontraktilitas, dan kerja jantung) telah stabil, asilkarnitin rantai panjang jenuh atau tak jenuh ditambahkan ke buffer perfusi dalam konsentrasi kumulatif. Jantung diperfusi dengan buffer yang mengandung setiap konsentrasi senyawa uji selama 10 menit.

2.5 Kultur sel
Lini sel jantung tikus embrionik H9C2 (ATCC® CRL-1446™) BD1x dibeli dari American Type Culture Collection (ATCC). Sel-sel tersebut dikultur dalam kondisi normoksik (5% CO 2 ) dalam medium Eagle yang dimodifikasi Dulbecco (DMEM) yang dilengkapi dengan 10% (v/v) FBS, streptomisin (100 μg/mL) dan penisilin (100 U/mL). Setelah mencapai konfluensi 80%, sel-sel tersebut diobati dengan 0,25% tripsin yang mengandung asam etilendiamintetraasetat (EDTA) dan disalurkan untuk percobaan berikutnya.

2.6 Uji MTT
Untuk penilaian aktivitas metabolisme sel H9C2, sel H9C2 disemai dalam pelat 96 sumur pada kepadatan 1 × 105 sel  /mL, dengan volume total 100 μL di setiap sumur. Setelah disemai, sel dibiarkan diam selama 6 jam. Sel diperlakukan dengan cis-OC, trans-OC, dan PC pada konsentrasi berkisar antara 10 hingga 30 μM, sementara DHA dan EPA ditambahkan pada konsentrasi berkisar antara 20 hingga 60 μM dan diinkubasi selama 2 jam. Setelah inkubasi, viabilitas sel dinilai melalui uji MTT. Secara singkat, 100 μL larutan MTT ditambahkan ke semua sumur (konsentrasi akhir 1 mg/mL) dan diinkubasi selama 2 jam pada +37°C. Setelah inkubasi, larutan MTT dibuang, dan 100 μL isopropanol ditambahkan untuk melarutkan endapan. Penyerapan diukur pada 570 dan 650 nm melalui pembaca mikroplat Hidex Sense.

2.7 Analisis kematian sel menggunakan analisis flow cytometry
Sel H9C2 disemai dalam pelat 6-sumur dengan kepadatan 1 × 106 sel  /mL (3 mL per sumur). Sel-sel tersebut kemudian dibiarkan diam dan menempel pada pelat selama 5 jam. Sel-sel tersebut selanjutnya diobati dengan cis-OC, trans-EC, atau PC pada konsentrasi 20 μM atau DHAC atau EPAC pada konsentrasi 40 μM. Sel-sel tersebut diinkubasi dengan senyawa uji selama 2 jam. Untuk menentukan mekanisme kematian sel H9C2, kami melakukan pewarnaan ganda melalui Annexin-V (BioLegend, 640920, San Diego, CA, AS) dan propidium iodida (PI) (Thermo Fisher Scientific, P1304MP, Eugene, Oregon, AS). 28 Singkatnya, setelah inkubasi dengan senyawa uji, sel dipanen melalui tripsin, dicuci dengan 1× PBS, dan disuspensikan kembali dalam 100 μL buffer pewarnaan dengan Annexin V yang dikonjugasikan ke APC (1:200) dan PI (konsentrasi akhir 2 μg/mL). Sampel diinkubasi selama 20 menit dalam gelap pada suhu kamar dan kemudian dianalisis melalui flow cytometry menggunakan BD FACS Melody Cell Sorter (BD Biosciences, San Jose, CA, AS).

2.8 Mikroskop fluoresensi
Untuk mikroskopi fluoresensi, sel H9C2 disemai dalam cawan berukuran 35 mm (Ibidi, μ-Dish, dasar kaca, Nomor Katalog 81158) pada kepadatan 1 × 105 sel  /mL dalam volume total 2 mL. Setelah disemai, sel-sel dibiarkan beristirahat selama 1 atau 2 hari agar dapat berdiferensiasi. Sel-sel tersebut diobati dengan cis-OC, trans-OC, atau PC pada konsentrasi 10 μM atau dengan DHAC atau EPAC pada konsentrasi 40 μM selama 2 jam. Untuk mewarnai membran sel, aglutinin kecambah gandum (WGA) dan konjugat CF488A (Biotium, Nomor Katalog 29022) ditambahkan pada konsentrasi akhir 1 μg/mL. Inti sel diwarnai dengan Hoechst 33342 pada konsentrasi akhir 1 μg/mL. Untuk mewarnai mitokondria, digunakan MitoTracker Deep Red FM (Thermo Fisher, M22426) pada konsentrasi akhir 200 nM. Semua pewarna ditambahkan 10 menit sebelum pencitraan. Gambar mikroskop fluoresensi diambil dengan instrumen Leica Stellaris 8 menggunakan lensa objektif perendaman air 86×/1.2.

2.9 Penilaian fungsi mitokondria
Tikus dibius dengan natrium pentobarbital (70 mg/kg), dan heparin diberikan secara intraperitoneal. Setelah refleks nosiseptif hilang, jantung segera diangkat. Serat jantung yang telah mengalami permeabilisasi disiapkan dari ventrikel kiri seperti yang dijelaskan sebelumnya. 27 Respirasi mitokondria dan produksi H 2 O 2 diukur pada suhu 37°C menggunakan instrumen Oxygraph-2k (O2k; Oroboros Instruments, Innsbruck, Austria) dengan O2k-Fluo-Modules dalam medium MiR05 (110 mM sukrosa, 60 mM K-laktobionat, 0,5 mM EGTA, 3 mM MgCl 2 , 20 mM taurin, 10 mM KH 2 PO 4 , dan 20 mM HEPES; pH 7,1; tanpa BSA). Media dioksigenasi ulang ketika konsentrasi oksigen menurun hingga 80 μM. Fluks H 2 O 2 diukur secara bersamaan melalui respirometri dengan O2k-Fluorometer menggunakan probe peka H 2 O 2 Ampliflu™ Red (AmR). Rasio fluks H 2 O 2 /O [%] dihitung sebagai fluks H 2 O 2 / (fluks O 2 0,5 ). 29 Efek asilkarnitin yang bergantung pada dosis pada OXPHOS mitokondria diuji dengan adanya piruvat, suksinat, dan malat (masing-masing 5, 10, dan 2 mM) dan ADP (5 mM). Asilkarnitin ditambahkan ke dalam ruang dalam konsentrasi kumulatif.

Respirasi mitokondria yang bergantung pada oksidasi asam lemak (FAO) pada serabut jantung diukur dengan adanya 0,5 mM malat dan asilkarnitin (10 μM). ADP ditambahkan pada konsentrasi 5 mM untuk menilai respirasi dalam keadaan OXPHOS. Piruvat (5 mM, substrat CI, jalur NADH (N)) kemudian ditambahkan untuk memulai respirasi yang terkait dengan jalur FN. Oksidasi piruvat dihitung sebagai perbedaan laju respirasi sebelum dan sesudah penambahan piruvat.

2.10 Western blotting
Untuk mengevaluasi efek asilkarnitin pada fosforilasi Akt, sel H9C2 disemai dalam pelat 6-sumur pada kepadatan 1 × 105 sel  /mL dalam volume total 2 mL per sumur. Setelah mencapai konfluensi 80%, sel-sel tersebut diobati dengan 10 μM cis-OC, trans-OC, atau PC, dan DHA atau EPA ditambahkan pada konsentrasi 40 μM selama 1 jam. Fosforilasi Akt basal dan terstimulasi insulin (insulin 10 nM ditambahkan 15 menit sebelum akhir inkubasi) diukur melalui analisis western blot. Sel-sel tersebut dilisiskan dengan prosesor ultrasonik (instrumen Cole-Parmer, AS) pada amplitudo 20% selama 20 detik dalam buffer lisis pada rasio 1:10 (b/v) pada suhu 4°C. Buffer lisis yang mengandung 100 mM Tris–HCl, pH 7,4, 10 mM EDTA, 5 mM MgCl 2 , 1 μM DTT, 2% Igepal, dan inhibitor protease (10 μM leupeptin, 1 μM pepstatin, 1 μM aprotinin, dan 100 μM PMSF) digunakan. Analisis PAGE dan western blot dari lisat jaringan dilakukan seperti yang dijelaskan sebelumnya. 25 Untuk mengukur tingkat Akt terfosforilasi pada Ser473, membran diinkubasi dengan antibodi anti-P-Akt (#sc-7985-R; Santa Cruz Biotechnology, CA, USA atau #4060S; Cell Signaling Technology, Danvers, MA, USA), dan nilainya dinormalisasi ke tingkat protein beta-aktin (Abcam, ab8224). Bercak dikembangkan melalui penggunaan reagen kemiluminesensi (Millipore), dan gambar diambil menggunakan sistem pencitraan gel Azure c400.

2.11 Analisis statistik
Semua data dinyatakan sebagai rata-rata ± standar galat rata-rata (SEM). Untuk analisis statistik, ANOVA satu arah diikuti oleh uji post hoc Tukey digunakan. Nilai p kurang dari 0,05 dianggap menunjukkan signifikansi statistik. Jumlah hewan dalam kelompok eksperimen ditetapkan menurut hasil dari percobaan percontohan dan pengalaman sebelumnya. Perhitungan statistik dilakukan menggunakan perangkat lunak Prism 10.3 (GraphPad, San Diego, California).

3 HASIL
3.1 Profil asilkarnitin pada jantung tikus
Tingkat asilkarnitin rantai panjang jenuh dan tak jenuh tunggal serta asam lemak tak jenuh ganda yang berasal dari PUFA diukur dalam jantung tikus C57BL/6N. Kandungan asetilkarnitin (C2) adalah yang tertinggi di antara semua asilkarnitin, diikuti oleh kadar asilkarnitin rantai pendek lainnya, propionilkarnitin dan butirilkarnitin (Gambar 1A ). Asilkarnitin rantai sedang dalam jantung tikus hadir pada konsentrasi yang lebih rendah (200–500 pmol/g). Kandungan asilkarnitin rantai panjang jenuh dan tak jenuh ganda yang paling melimpah adalah 1000–2000 pmol/g jantung (Gambar 1C ). Sebagai perbandingan, kandungan rata-rata asilkarnitin yang berasal dari PUFA lebih rendah, dan kandungan EPAC dan DHAC rata-rata masing-masing adalah 11 ± 1 dan 275 ± 34 pmol/g. Meskipun kandungan EPAC cukup rendah, kadar DHAC sebanding dengan kadar asilkarnitin C14:0, C18:0, dan C18:2. Kadar EPAC dan DHAC kira-kira 0,1% dari kadar PUFA nonesterifikasi

3.2 Efek acylcarnitines pada fungsi jantung pada jantung tikus yang diisolasi
Tingkat semua asilkarnitin yang dipilih diuji dalam jantung tikus yang diperfusi secara terisolasi untuk mengevaluasi efek asilkarnitin pada fungsi jantung. Penambahan asilkarnitin ke buffer perfusi pada konsentrasi rendah (4 μM) meningkatkan tekanan ventrikel kiri yang berkembang (LVDP) dan kontraktilitas jantung tikus (Gambar 2A,B ). LVDP meningkat sebesar 10 dan 27 mm Hg sebagai respons terhadap 4 μM PC dan trans-EC, masing-masing. Demikian pula, 8 μM EPAC dan DHAC meningkatkan LVDP sebesar 9–12 mm Hg. Peningkatan konsentrasi PC dan trans-EC yang bersirkulasi menjadi 8 μM secara substansial menurunkan LVDP masing-masing sebesar 21 dan 47 mm Hg. Perfusi jantung dengan buffer yang mengandung trans-EC pada konsentrasi 8 μM secara signifikan menurunkan kontraktilitas jantung. Penurunan serupa pada LVDP dan disfungsi jantung diamati setelah pemberian PC dan cis-OC pada konsentrasi 12 μM. Jika tanda-tanda disfungsi jantung (penurunan signifikan pada LVDP) diamati, konsentrasi asilkarnitin jenuh dan tak jenuh tunggal tidak meningkat lebih lanjut. Dengan adanya DHAC dan EPAC, penurunan kecil pada LVDP sebesar 11–23 mm Hg diamati; namun, jantung tetap berfungsi bahkan dengan adanya asilkarnitin yang berasal dari PUFA 20 dan 28 μM.

Mirip dengan perubahan dalam LVDP, kontraktilitas jantung meningkat dengan adanya konsentrasi rendah asilkarnitin dan kemudian menurun secara signifikan setelah penambahan PC dan kedua enantiomer OC pada konsentrasi 8–12 μM. Seperti yang ditunjukkan dalam gambar representatif yang menunjukkan LVDP (Gambar 2A ), baik kontraktilitas dan relaksasi jantung dipengaruhi oleh PC, cis-OC, dan trans-EC (Gambar 2C ). Asilkarnitin yang berasal dari PUFA sedikit mengurangi kontraktilitas; namun, efek ini tidak merugikan bahkan pada konsentrasi 20 dan 28 μM.

Denyut jantung rata-rata dari jantung tikus yang diisolasi tanpa pacu pada awal adalah 279 BPM (Gambar 2D ). Penambahan asilkarnitin rantai panjang ke dalam buffer perfusi mengubah denyut jantung. PC pada konsentrasi terendah (hingga 8 μM) tidak memengaruhi denyut jantung, tetapi pada konsentrasi di atas 8 μM, PC secara nyata meningkatkan denyut jantung hingga 647 BPM karena fibrilasi. Denyut jantung menurun masing-masing sebesar 66 BPM dan 100 BPM, sebagai respons terhadap 8 μM cis-OC dan trans-EC. Seperti PC, cis-OC dan trans-EC juga menyebabkan episode aritmia yang sering pada konsentrasi 8 μM, yang membatasi penilaian denyut jantung yang akurat. Gangguan irama jantung tidak diamati pada jantung yang diperfusi dengan buffer yang mengandung EPAC atau DHAC. Penurunan bertahap dalam denyut jantung diamati setelah penambahan kedua acylcarnitine yang berasal dari PUFA pada konsentrasi 12–28 μM, dengan penurunan maksimum 160 BPM pada konsentrasi tertinggi yang diuji.

Aliran koroner pada awal adalah 1,8 mL/menit (Gambar 2E ). Penambahan PC dan trans-EC menyebabkan penurunan aliran koroner yang nyata sebesar 0,9 dan 0,8 mL/menit, masing-masing, yang mungkin terkait dengan efek asilkarnitin pada pembuluh darah yang mengakibatkan penurunan LVDP dan vasokonstriksi. Efek ini tidak diamati untuk cis-OC atau kedua asilkarnitin yang berasal dari PUFA, yang menyebabkan vasodilatasi dan peningkatan aliran koroner yang signifikan hingga 0,8–1,4 mL/menit.

3.3 Efek acylcarnitines pada viabilitas sel jantung H9C2
Di sini, kami menguji efek toksisitas yang diinduksi asilkarnitin pada metabolisme sel jantung H9C2 melalui uji MTT (Gambar 3 ). PC dan cis-OC menginduksi penurunan viabilitas sel dengan adanya asilkarnitin pada konsentrasi 10 μM. Peningkatan lebih lanjut pada konsentrasi asilkarnitin PC, cis-OC, dan trans-EC hingga 20 μM mengakibatkan penurunan signifikan pada aktivitas metabolik sebesar 50%–60%. Konsentrasi tertinggi asilkarnitin jenuh dan tak jenuh tunggal yang diuji dalam uji ini adalah 30 μM, yang menurunkan aktivitas metabolik sebesar 70%–90%. Efek asilkarnitin turunan PUFA diuji pada konsentrasi berkisar antara 20 hingga 60 μM. Pada konsentrasi berkisar antara 20 hingga 40 μM, kedua jenis asilkarnitin yang berasal dari PUFA sedikit menurunkan aktivitas metabolisme sel hingga 10%–20%. Lebih jauh lagi, ketika konsentrasi ditingkatkan hingga 60 μM, aktivitas metabolismenya adalah 110% dan 105% dari kontrol. Secara keseluruhan, dibandingkan dengan asilkarnitin rantai panjang jenuh dan tak jenuh tunggal, asilkarnitin yang berasal dari PUFA tidak beracun bagi sel H9C2.

Untuk memperjelas mekanisme sitotoksisitas asilkarnitin, kami menggunakan pewarnaan Annexin dan PI serta flow cytometry untuk menentukan jumlah sel apoptotik dan nekrotik (Gambar 3C,D ). Pada kelompok kontrol, tingkat rendah apoptosis awal dan akhir serta nekrosis terdeteksi. Sebanyak 2,0% sel merupakan sel apoptotik awal, 1,8% merupakan sel apoptotik akhir, dan 3,4% sel merupakan sel nekrotik. Pada sel yang diobati dengan asilkarnitin jenuh dan tak jenuh tunggal 20 μM, peningkatan tingkat apoptosis dan nekrosis diamati. Persentase sel apoptotik dan nekrotik awal meningkat masing-masing 1,9 dan 1,4 kali lipat pada kelompok yang diobati dengan PC dibandingkan dengan kelompok kontrol. Demikian pula, tingkat nekrosis dan apoptosis yang lebih besar diamati pada sel yang diobati dengan cis-OC dibandingkan pada sel kontrol. Tingkat apoptosis dini tertinggi (2,2 kali lipat lebih besar daripada yang ada pada kontrol) diamati pada sel yang diobati trans-EC. Menurut hasil ini (Gambar 3D ), dalam waktu 2 jam, asilkarnitin jenuh dan tak jenuh tunggal secara nyata mengganggu aktivitas metabolik (uji MTT) sel jantung dan menginduksi kematian sel apoptotik dan nekrotik; namun, tingkat kerusakan metabolik jauh lebih besar daripada tingkat kematian sel apoptotik dan nekrotik. Pada sel yang diinkubasi dengan 40 μM EPAC atau DHAC, tingkat apoptosis dan nekrosis yang relatif lebih rendah diamati.

Untuk mempelajari lebih lanjut mekanisme toksisitas asilkarnitin, kami mengevaluasi morfologi mitokondria dalam sel H9C2 2 jam setelah penambahan asilkarnitin ke dalam medium (Gambar 3E ). Perlakuan dengan PC, cis-OC, dan trans-EC pada konsentrasi 10 μM mengganggu jaringan mitokondria dan mendorong pergerakan mitokondria yang terfragmentasi menuju inti sel dan pembelahan mitokondria berikutnya menjadi organel kecil (Gambar 3E ). Sebaliknya, perlakuan dengan 40 μM EPAC atau DHAC tidak memengaruhi sel H9C2 atau mitokondria, dan morfologi mitokondria serupa dengan yang ada pada sel kontrol bahkan setelah perlakuan 40 μM EPAC dan DHAC. Hasil-hasil ini menunjukkan bahwa mitokondria adalah target utama dari efek merugikan asilkarnitin rantai panjang.

3.4 Efek asilkarnitin pada mitokondria
Untuk memperjelas efek metabolik asilkarnitin, dampak asilkarnitin pada fungsi mitokondria diuji pada serat jantung tikus yang diisolasi (Gambar 4A ). Penambahan asilkarnitin 5 μM ke dalam medium secara nyata menurunkan OXPHOS dalam mitokondria jantung (Gambar 4B ). PC, cis-OC, dan trans-EC menurunkan respirasi mitokondria masing-masing sebesar 25%, 40%, dan 35%. EPAC dan DHAC menurunkan respirasi mitokondria hanya sebesar 10%–14%, dan efek ini secara signifikan berbeda dari asilkarnitin lain yang diuji. Pada konsentrasi 10 μM, kedua jenis asilkarnitin turunan PUFA menurunkan OXPHOS sebesar 21%–25%. Pada konsentrasi yang sama, asilkarnitin lain menurunkan OXPHOS sebesar 45%–53%. Lebih jauh lagi, peningkatan konsentrasi asilkarnitin yang berasal dari PUFA hingga 25 μM tidak secara substansial memengaruhi fungsi mitokondria; namun, asilkarnitin lainnya secara bertahap menurunkan OXPHOS dalam mitokondria jantung hingga 70% dengan adanya asilkarnitin 25 μM. Semua asilkarnitin yang diteliti sepenuhnya menghambat respirasi mitokondria pada konsentrasi 50 μM.

Produksi ROS diukur secara paralel dengan respirasi yang bergantung pada OXPHOS (Gambar 4A,C ). Variabilitas yang tinggi dalam kadar ROS diamati; namun, dengan adanya asilkarnitin yang berasal dari PUFA, produksi ROS yang lebih rendah diamati, sementara trans-EC menyebabkan peningkatan produksi ROS terbesar di seluruh konsentrasi yang diuji.

Lebih jauh, kami mengevaluasi laju metabolisme mitokondria asilkarnitin sebagai substrat pada keadaan OXPHOS (Gambar 4D ). Laju oksidasi PC adalah yang tercepat, sedangkan laju metabolisme cis-OC dan EPAC sekitar 20% lebih lambat. Oksidasi trans-EC dan DHAC jauh lebih lambat daripada oksidasi asilkarnitin lainnya. Isomer trans EC dan panjang rantai DHAC mungkin membatasi laju metabolisme mereka di mitokondria.

PC dikenal sebagai penghambat metabolisme piruvat dalam mitokondria; oleh karena itu, kami membandingkan laju oksidasi piruvat dengan adanya berbagai asilkarnitin (Gambar 4E ). Pada konsentrasi 10 μM, PC, cis-OC, dan trans-EC secara signifikan menurunkan oksidasi piruvat dalam mitokondria hingga 60%. Oksidasi piruvat hanya 13% dan 30% lebih rendah pada kelompok yang diobati dengan 10 μM DHAC dan EPAC dibandingkan pada kelompok kontrol. Secara keseluruhan, asilkarnitin jenuh dan tak jenuh tunggal memengaruhi oksidasi piruvat secara substansial lebih banyak daripada asilkarnitin yang berasal dari PUFA.

3.5 Efek asilkarnitin pada sinyal insulin
Acylcarnitine rantai panjang memengaruhi pensinyalan insulin; oleh karena itu, kami membandingkan efek dari berbagai acylcarnitine pada tingkat fosforilasi Akt pada kardiomiosit H9C2. Tingkat P-Akt pada sel kontrol H9C2 sangat rendah, sedangkan stimulasi insulin selama 10 menit secara nyata meningkatkan fosforilasi Akt (Gambar 5 ). Untuk meningkatkan tingkat acylcarnitine intraseluler, sel H9C2 diinkubasi terlebih dahulu dengan berbagai acylcarnitine selama 50 menit. Penambahan PC ke dalam medium sel pada konsentrasi 10 μM mengurangi fosforilasi Akt yang terstimulasi insulin sebanyak 3 kali lipat (Gambar 5A ). Efek serupa diinduksi oleh 10 μM cis-OC, sementara pengobatan dengan trans-EC menurunkan fosforilasi Akt ke tingkat pada kelompok kontrol. Selanjutnya, kami membandingkan efek PC dengan efek asilkarnitin turunan PUFA dan menemukan bahwa pada 10–20 μM, baik EPAC maupun DHAC tidak memengaruhi fosforilasi Akt. Lebih jauh, peningkatan konsentrasi EPAC dan DHAC hingga 40 μM mengakibatkan penurunan kadar P-Akt; namun, efeknya masih kurang terasa dibandingkan efek PC pada konsentrasi 10 μM

4 DISKUSI
Dalam penelitian ini, kami menyoroti persamaan dan perbedaan dalam efek asilkarnitin rantai panjang jenuh, tak jenuh tunggal, dan tak jenuh ganda yang umum pada fungsi jantung, viabilitas sel jantung, fungsi mitokondria, dan jalur pensinyalan insulin. Biasanya, kandungan asilkarnitin mencerminkan komposisi asam lemak jaringan dan mungkin sangat bergantung pada kandungan asam lemak lipid makanan. Dalam penelitian kami, kami menemukan bahwa asilkarnitin yang paling melimpah, PC dan cis-OC, dapat berkontribusi terhadap gangguan fungsi jantung dan kerusakan jantung pada tingkat yang sama; oleh karena itu, kadar total asilkarnitin rantai panjang jenuh dan tak jenuh tunggal harus diperhitungkan saat memperkirakan potensi toksisitas intraseluler asilkarnitin. Dalam berbagai sistem (jantung, sel, dan mitokondria yang terisolasi), PC dan cis-OC memiliki efek merugikan pada konsentrasi mikromolar rendah dalam penelitian kami. Konsentrasi endogen jantung dari masing-masing asilkarnitin rantai panjang berada dalam kisaran 0,5–2 μM, yang secara bersama-sama setara dengan konsentrasi lebih besar dari 5 μM (nmol/g). Puasa menyebabkan peningkatan kadar asilkarnitin rantai panjang secara bertahap. 30 , 31 Dengan demikian, kadar total asilkarnitin rantai panjang dalam jaringan selama kelaparan berkepanjangan mungkin mendekati kadar yang menyebabkan kerusakan mitokondria dan jantung dalam kondisi patologis.

Karena CPT1 terlokalisasi pada membran luar mitokondria, sebagian besar asilkarnitin rantai panjang terakumulasi di ruang antarmembran mitokondria 13 ; oleh karena itu, tempat utama kerja asilkarnitin rantai panjang ada di mitokondria. Ketika asilkarnitin ditambahkan secara ekstraseluler, penting untuk menentukan apakah asilkarnitin rantai panjang dapat memasuki sel dalam jumlah yang cukup. Dalam penelitian ini, kami mengamati bahwa asilkarnitin rantai panjang memasuki sel jantung dan memiliki efek merugikan pada mitokondria. Kami mengamati bahwa pada kadar rendah, asilkarnitin merupakan substrat yang efisien untuk OXPHOS yang mendukung kontraktilitas jantung dan metabolisme mitokondria. Selain itu, asilkarnitin rantai panjang dapat menyebabkan peningkatan konsentrasi kalsium intraseluler, yang mungkin juga menjadi alasan kemampuannya untuk merangsang kontraksi jantung. 32 Kami mengamati bahwa semua asilkarnitin yang diuji meningkatkan kontraktilitas jantung, yang menunjukkan transpor asilkarnitin yang efisien dalam sel jantung. Laju oksidasi PC, cis-OC, dan EPAC dalam mitokondria serupa, yang mengonfirmasi bahwa asilkarnitin ini memiliki laju transpor yang sebanding ke dalam mitokondria. Namun, PC dan cis-OC secara signifikan lebih beracun bagi mitokondria daripada EPAC. Dibandingkan dengan EPAC, DHAC memiliki dua atom karbon tambahan, dan rantai asam lemaknya yang lebih panjang dapat menjelaskan laju oksidasinya yang lebih lambat dalam mitokondria. Kami juga mengukur kadar DHA dan DHAC yang lebih tinggi di jantung tikus, yang dapat menjadi hasil dari metabolisme mereka yang lebih lambat sebagaimana diukur dalam uji mitokondria. Lebih jauh, karena konformasi trans-EC yang tidak alami, kami mengamati laju oksidasi yang lebih lambat dalam mitokondria; namun, hanya trans-EC, tetapi bukan DHA, yang beracun bagi mitokondria. Secara keseluruhan, konsentrasi yang lebih tinggi dari asilkarnitin yang jenuh dan tak jenuh tunggal, tetapi bukan yang berasal dari EPA dan DHA, menyebabkan efek merugikan yang terkait dengan kerusakan mitokondria, penghambatan pensinyalan Akt, dan kemungkinan saluran ion. Efek-efek ini tidak bergantung pada laju translokasi atau oksidasi asilkarnitin rantai panjang dalam sel dan mitokondria. Asam lemak trans telah dikaitkan dengan berbagai risiko kesehatan, terutama penyakit kardiovaskular seperti penyakit jantung koroner dan diabetes. 11 , 33 Asupan lemak trans mungkin mencapai 2%–3% dari total asupan kalori, yang kira-kira 20%–30% dari total asam lemak yang dikonsumsi. 11 Tindakan merugikan dari asam lemak trans dikaitkan dengan peningkatan kadar kolesterol lipoprotein densitas rendah (LDL) dan peradangan. Kami mengamati bahwa metabolisme mitokondria dari trans-EC secara signifikan lebih lambat daripada cis-OC. Temuan ini sejalan dengan penelitian sebelumnya yang menunjukkan bahwa metabolisme asam elaidat lebih lambat di mitokondria hati, tetapi lebih banyak asam elaidat dimasukkan ke dalam spesies yang larut dalam asam, kemungkinan besar asilkarnitin. 34 ,35 Dalam penelitian ini, kami menemukan bahwa trans-EC lebih beracun daripada cis-OC dalam mitokondria jantung dan jantung tikus yang diisolasi. Asilkarnitin rantai panjang jenuh dan tak jenuh tunggal menyebabkan peningkatan produksi ROS yang nyata; namun, trans-EC menyebabkan laju produksi ROS yang jauh lebih tinggi yang dapat mengakibatkan kardiotoksisitas yang lebih nyata. Memang, trans-EC menyebabkan disfungsi jantung yang diisolasi pada konsentrasi 1,5 kali lebih rendah daripada cis-OC. Secara keseluruhan, trans-asilkarnitin dari asam lemak rantai panjang lebih berbahaya bagi jantung daripada cis-asilkarnitin alami, memiliki kecenderungan lebih besar untuk terakumulasi karena metabolismenya yang lebih lambat, dan dapat meningkatkan risiko penyakit jantung.

Kami baru-baru ini melaporkan bahwa FABP3 dapat mengikat asilkarnitin rantai panjang dan dengan demikian melindungi jantung terhadap efek samping asilkarnitin. 24 Dalam penelitian yang sama, kami juga menunjukkan bahwa asam lemak mengikat lebih kuat ke FABP3 dan menggantikan asilkarnitin di kantong pengikat. Dengan demikian, peningkatan kadar asam lemak intraseluler meningkatkan kandungan asilkarnitin bebas, yang kemudian memberikan efek yang merugikan. 13 Pengikatan EPAC ke FABP3 sangat lemah, menunjukkan bahwa asilkarnitin yang berasal dari PUFA memiliki konformasi yang berbeda dari asilkarnitin jenuh dan tak jenuh tunggal. Konformasi PUFA yang berbeda mungkin menjelaskan mengapa asilkarnitin yang berasal dari PUFA mengikat lebih lemah ke protein dalam mitokondria dan jalur pensinyalan insulin dan dengan demikian menyebabkan lebih sedikit reaksi yang merugikan.

Kegagalan untuk memetabolisme asam lemak tak jenuh telah dikaitkan dengan gangguan metabolik yang parah. 36 Dengan demikian, untuk beta-oksidasi mitokondria asam lemak tak jenuh, enzim 2,4-dienoyl-CoA reduktase (DECR) diperlukan. 36 Secara khusus, enzim ini mengkatalisis reduksi 2,4-dienoyl-CoA menjadi 3-trans-enoyl-CoA selama degradasi asam lemak tak jenuh dengan ikatan rangkap terkonjugasi. Defisiensi DECR telah dipelajari pada pasien dengan penyakit langka dan pada model hewan dengan knockout gen Decr. Pada pasien, defisiensi DECR merupakan akibat sekunder dari defisiensi NAD kinase mitokondria, yang mengakibatkan gejala parah seperti keterlambatan perkembangan, hipotonia, kejang, dan asidosis metabolik. 37 Selama puasa, akumulasi asam lemak tak jenuh dan asilkarnitin yang sesuai diamati pada tikus KO Decr. 36 Akan tetapi, selain kadar asilkarnitin PUFA yang meningkat, konsentrasi semua asilkarnitin rantai panjang, termasuk PC dan OC, meningkat dalam plasma tikus Decr KO. Mengingat toksisitas yang lebih rendah dari asilkarnitin turunan PUFA yang diamati dalam penelitian ini, asilkarnitin turunan PUFA, PC dan OC, tetapi bukan asilkarnitin turunan PUFA, dapat berkontribusi terhadap perubahan metabolik pada tikus Decr KO.

Gangguan oksidasi asam lemak (FAOD) adalah defisiensi resesif autosomal langka dari enzim dan transporter yang terlibat dalam metabolisme asam lemak di mitokondria. 38 Cacat pada protein yang bertanggung jawab untuk metabolisme asam lemak rantai panjang dan sangat panjang jauh lebih parah daripada cacat pada protein yang bertanggung jawab untuk jenis oksidasi asam lemak lainnya karena menyebabkan akumulasi asilkarnitin rantai panjang yang berlebihan. Dalam penelitian ini, kami menunjukkan bahwa asilkarnitin jenuh dan tak jenuh tunggal dapat memberikan efek merugikan jika melebihi konsentrasi fisiologis sebanyak 2–3 kali lipat. Pada pasien dengan FAOD parah, peningkatan kadar asilkarnitin dapat 10 kali lipat lebih besar selama episode krisis metabolik, yang terjadi selama masa peningkatan permintaan metabolik, seperti puasa, stres fisiologis, dan olahraga berkepanjangan. 38 Pengobatan FAOD umumnya melibatkan pembatasan diet untuk meminimalkan akumulasi asilkarnitin rantai panjang dan dengan demikian mencegah krisis. Untuk menghindari akumulasi asam lemak rantai panjang, pada kasus FAOD yang sangat bergejala, trigliserida rantai menengah dari makanan disarankan untuk menggantikan asam lemak rantai panjang. PUFA tidak pernah disarankan sebagai terapi pengganti bagi pasien dengan FAOD. Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa pada pasien dengan FAOD, suplemen yang mengandung PUFA tidak hanya membantu memulihkan asam lemak esensial tetapi juga merupakan sumber asam lemak yang lebih aman dalam hal akumulasi EPAC dan DHAC.

Latihan menghasilkan akumulasi fisiologis asilkarnitin rantai panjang pada otot 39 , 40 ; namun, akumulasi asilkarnitin rantai panjang yang berlebihan dapat berkontribusi terhadap kerusakan otot akibat latihan. Mekanisme nyeri otot dan penurunan fungsi otot sementara yang disebabkan oleh peningkatan kadar ROS dan peradangan pada periode pascalatihan mungkin sebagian besar disebabkan oleh akumulasi berlebihan asilkarnitin rantai panjang jenuh dan tak jenuh tunggal. Pada subjek dengan FAOD, latihan bersama dengan periode puasa yang lama dapat menyebabkan krisis metabolik dan kerusakan otot yang parah. 15 Memang, suplemen yang mengandung asam lemak omega-3 PUFA disarankan untuk mengurangi dampak kerusakan otot akibat latihan dan memfasilitasi pemulihan otot yang lebih cepat. 41 Asam lemak omega-3 PUFA telah terbukti mengurangi kadar penanda kerusakan otot, seperti kreatin kinase, laktat dehidrogenase, dan interleukin proinflamasi, setelah protokol latihan yang sangat merusak. 42 , 43 Efek menguntungkan dari PUFA dalam mencegah kerusakan akibat olahraga mungkin terkait dengan keamanan yang relatif lebih tinggi dari asilkarnitin yang berasal dari PUFA.

5 KESIMPULAN
Asilkarnitin jenuh dan tak jenuh tunggal sama-sama beracun bagi mitokondria dan sel jantung, dan konsentrasi total asilkarnitin endogen di jantung dapat mencapai kadar yang membahayakan saat terakumulasi dalam berbagai penyakit. Trans-EC lebih beracun bagi jantung daripada cis-OC alami dan dapat menyebabkan efek berbahaya lemak trans pada sistem kardiovaskular. Asilkarnitin turunan asam lemak omega-3 PUFA EPAC dan DHAC aman dan kecil kemungkinannya merusak mitokondria jantung, sel jantung, dan jantung daripada asilkarnitin lainnya; oleh karena itu, asupan PUFA mungkin lebih aman daripada sumber lipid lain yang mengandung asam lemak rantai panjang pada pasien dengan FAOD dan penyakit kardiometabolik.